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1不明原因肺炎病例的实验室诊断广州市第八人民医院检验科卢业成2主要内容不明原因肺炎的病原学实验室生物安全标本的采集、包装、运送及保存不明原因肺炎的实验室检测注意事项3一、不明原因肺炎的病原学肺炎细菌性肺炎：肺炎链球菌、克雷伯菌、葡萄球菌、……Atypicalpneumonias支原体肺炎衣原体肺炎军团菌肺炎……非感染性肺炎：过敏性肺炎、肺血管炎、急性间质性肺炎…有流感症状的疾病：普通感冒、流感、艾滋病、免疫抑制合并肺部感染…其他传染性肺炎：炭疽、肺鼠疫…不明原因肺炎SARS高致病性人禽流感4SARS的病原学SARS-CoV属冠状病毒科冠状病毒属的有包膜病毒。病毒基因组为单股正链RNA，30,000个核苷酸组成；与经典冠状病毒仅有约60%同源性，但其组织形式与其他冠状病毒相似。双层脂膜，外膜蛋白包括糖蛋白S、M和小衣壳E蛋白。M糖蛋白仅有短的氨基末端结构域暴露于包膜外面；长而弯曲的羧基末端与单一分子的基因组RNA及多分子的碱性N蛋白组成螺旋状核衣壳结构。5SARS-CoV的生物学特性：室温下在尿液里至少可存活10天，在腹泻患者的痰液和粪便里能存活5天以上，在血液中可存活约15天，在塑料/玻璃/马赛克/金属/布料/复印纸等物体表面可存活2～3天。病毒对温度敏感，随温度升高抵抗力下降，37℃可存活4天，56℃加热90min、75℃加热30min能够灭活病毒。紫外线照射60min可杀死病毒。病毒对有机溶剂敏感，乙醚4℃条件下作用24小时可完全灭活病毒，75%乙醇作用5分钟可使病毒失去活力，含氯的消毒剂作用5分钟可以灭活病毒。6*属正粘病毒科甲型流感病毒属。呈多形性，有囊膜。*病毒基因组为分节段单股负链RNA。*能感染人的亚型有H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3等，其中感染H5N1的患者病情重，病死率高。禽流感病毒结构示意图7禽流感病毒的生物学特性：对乙醚、氯仿、丙酮等有机溶剂敏感。常用消毒剂易将其灭活，如氧化剂、稀酸、卤素化合物（漂白粉和碘剂）等能迅速破坏其活性。对热比较敏感，但对低温抵抗力较强，65℃30min或煮沸2min可灭活。在较低温粪便中可存活1周，在4℃水中可存活1个月，对酸性环境有一定抵抗力，在pH4.0也具有一定存活能力。在有甘油存在的情况下可保持活力1年以上。裸露的病毒在直射阳光下40～48h即可灭活，如果用紫外线直接照射，可迅速破坏其活性。8不明原因肺炎检测实验室的设置按《传染性非典型肺炎实验室检测工作程序》及的要求建立国家、省和地（市）级临床标本三级实验室检测网络体系。卫生部在中国CDC病毒病预防控制所(国家流感中心)和传染病预防控制所设立国家级检测实验室。广东省卫生厅确认省CDC（流感实验室）为我省中心实验室，广州市CDC为平行中心实验室。并建立覆盖全省的初筛实验室。9二、实验室生物安全为加强对传染性非典型肺炎实验室的管理工作，避免发生实验室内感染和对环境的污染，避免由于实验室操作不当造成SARS的传播，保障实验室人员的安全和健康，卫生部办公厅于2003年6月16日印发《传染性非典型肺炎实验室生物安全操作规范》。所有参与SARS防治和研究的实验室和实验室工作人员都必须遵守。同时废止2003年4月29日印发的《传染性非典型肺炎实验室生物安全操作指南》。10二、实验室生物安全按照《传染性非典型肺炎实验室生物安全操作规范》的要求所有实验室人员应采取规范的生物安全防护，并经过相应的专业技术培训。凡操作活病毒的试验必须在生物安全III级（BSL-3）或以上级的实验室中进行。其余的临床试验可在生物安全II级+（BSL-2+）实验室或全排式生物安全柜中进行。从事患者样品常规检验应使用专用实验室和仪器。11二、实验室生物安全下列操作必须在生物安全3级(BSL3)或以上级实验室中进行：用细胞培养的方法分离病毒；收集或浓缩病毒或其培养产物；用活病毒或病毒的全基因接种动物。12二、实验室生物安全下列操作必须在生物安全2级(BSL2)或以上级实验室，或全排式生物安全柜中进行：咽拭子/含漱液/痰液/尿/粪便/血清和血液等样品的诊断检测；溶解、固定或用其他方法处理灭活的病毒和(或)无传染性的病毒基因片段；常规的细菌和毒素检查；可能产生气溶胶的样品处理；...