质谱定量的原则系列讲座(转自分析测试百科叮当 空间)质谱定量的原则01--目录:1.质谱定量的简介a) 总离子流b) 选择离子监测( SIM )c) 选择反应监测( SRM/MRM )2.开发一个 SRM 方法3.内标4.PK/LC/MS/MS 药物代谢动力学的LC/MS/MS 的反相液相色谱的方法开发5.样品制备6.标准和标准曲线的准备a) 做标准曲线的步骤b) 标准曲线的稀释方案Scheme的举例c) 标准曲线的运行d) 进行标准品和样品的随机化e) 系统运行的实用性f) “QCs”质量控制7.相关的 PK 资源8.定量的技巧 Tips质谱定量的原则02—— 质谱定量的简介和LC/MS 监测的模式简介本教程主要用于:使用质谱作小分子药代动力学分析,即PK/MS
除此之外,这些同样的原则也可用于生物基质中肽和蛋白的定量
传统上,在使用现代质谱定量之前, 定量是用 HPLC 高效液相色谱和 UV 紫外检测器实现的
HPLC 药代动力学分析建立在保留时间、峰面积和紫外光谱性质的基础上的
HPLC 方法的缺点是灵敏度不够、缺乏特异性
我们已经看到一些实例,一个化合物的确已经代谢了,然而保留时间和紫外光谱上,母离子和代谢物无法区分
这种缺少特异性的分析时不时会误导研究者
所以在药代动力学分析中,基于质谱的表征现在是一种新型的重要的工具
质谱定量中已经被广泛接受的方式是MS/MS 定量
这种定量常通过三级四极杆或离子阱质谱实现
要求使用MS/MS 的原因是:许多化合物有同样的质量
当使用第一个维度即单级质谱MS 去定量时, 也会缺乏特异性, 尤其是对于像血液那样的复杂的基质
第二个维度的MS(即 MS/MS)在大多数情况下,能够提供唯一的断裂
合并特异的母离子质量和唯一的碎片离子信息,可以选择性地监测被定量的化合物
下面我们将讨论获得和可视化LC/MS 数据的方法