细胞凋亡检测，细胞凋亡实验步骤，检测方法一、定性和定量研究只定性的研究方法：常规琼脂糖凝胶电泳、脉冲场倒转琼脂糖凝胶电泳、形态学观察（普通光学显微镜、透射电镜、荧光显微镜）进行定量或半定量的研究方法：各种流式细胞仪方法、原位末端标记法、ELISA定量琼脂糖凝胶电泳。二、区分凋亡和坏死可将二者区分开的方法：琼脂糖凝胶电泳，形态学观察（透射电镜是是区分凋亡和坏死最可靠的方法），Hoechst33342/PI 双染色法流式细胞仪检测，AnnexinV/PI 双染色法流式细胞仪检测等。不能将二者区分开的方法：原位末端标记法、PI 单染色法流式细胞仪检测等。三、样品来源不同选择组织：主要用形态学方法（HE 染色，透射电镜、石蜡包埋组织切片进行原位末端标记，ELISA 或将组织碾碎消化做琼脂糖凝胶电泳）。四、细胞凋亡检测1、早期检测：1）PS（磷脂酰丝氨酸）在细胞外膜上的检测2）细胞内氧化还原状态改变的检测3）细胞色素 C 的定位检测4）线粒体膜电位变化的检测2、晚期检测：细胞凋亡晚期中，核酸内切酶在核小体之间剪切核 DNA，产生大量长度在 180-200bp 的 DNA 片段。对于晚期检测通常有以下方法：1）TUNEL（末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP 缺口末端标记）2）LM-PCRLadder（连接介导的 PCR 检测）3）TelemeraseDetection（端粒酶检测）3、生化检测：1）典型的生化特征：DNA 片段化2）检测方法主要有：琼脂糖凝胶电泳、原位末端标记（TUNEL）等3）TUNEL（末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP 缺口末端标记）4）通过 DNA 末端转移酶将带标记的 dNTP（多为 dUTP）间接或直接接到 DNA片段的 3'-OH 端，再通过酶联显色或荧光检测定量分析结果。可做细胞悬液、福尔马林固定或石蜡处理的组织、细胞培养物等多种样本的检测。4、LM-PCRLadder（连接介导的 PCR 检测）当凋亡细胞比例较小以及检测样品量很少（如活体组织切片）时，直接琼脂糖电泳可能观察不到核 DNA 的变化。通过 LM-PCR，连上特异性接头，专一性地扩增梯度片段，从而灵敏地检测凋亡时产生梯度片段。此外，LM-PCR 检测是半定量的，因此相同凋亡程度的不同样品可进行比较。如果细胞量很少，还可在分离提纯 DNA 后，用 32P-ATP 和脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）使 DNA 标记，然后进行电泳和放射自显影，观察凋亡细胞中 DNAladder 的形成。上述两种方法都针对细胞凋亡晚期核 DNA 断裂这一特征，但细胞受到其它损伤（如机械损伤，紫外线等）也...
