补体检测及应用VIP免费

第十九章补体检测及应用存在于人和脊椎动物血清或组织液,具有酶样活性、不耐热的糖蛋白由肝细胞、巨噬细胞以及肠粘膜上皮细胞等多种细胞产生均为多糖蛋白，可以辅助抗体发挥溶细胞作用补体不是单一成分，以“补体系统”存在在正常人血清中含量相对稳定；某些疾病时，含量及其活性可发生改变，因此对补体含量与活性进行检测，对相关疾病进行诊断。补体（complement，C）第一节概述一、补体成分的含量与理化特性1、根据补体系统的生物学功能分类补体固有成分补体调节蛋白补体受体(complementreceptor,CR)补体成分分子量电泳区带血清含量参考值（μg/ml）补体成分分子量电泳区带血清含量参考值（μg/ml）C1q390γ270C979α240C1r95β35B95β210~240C1s85α35D25α2C2117β120~30P220γ225C3190β11300C1INH150α180C4180β2430~600C4bp1100250C5190β275I因子93β50C6128β260H因子159β400~480C7120β255S因子88α500C8163γ1200对热不稳定，56℃、30min即被灭活，0～10℃条件下活性只能保持3～4d。多种理化因素如射线、机械振荡、酒精、胆汁和某些添加剂等均可破坏补体2、补体的理化特性二、补体的活化途径P因子经典激活途径旁路激活途径MBL途径激活物质抗原抗体复合物微生物表面膜性结构（肽聚糖、酵母多糖、脂多糖等）MBL、C反应蛋白起始分子C1qC3C2、C4参与补体成分C1、C4、C2、C3、C5-C9C3、C5-C9、B因子、D因子C2-C9、MASP所需离子Ca2+、Mg2+Mg2+Ca2+C3转化酶C4b2bC3bBbC4b2bC5转化酶C4b2b3bC3bnBbC4b2b3b生物学作用参与特异性免疫的效应段,感染后期发挥作用参与非特异性免疫的效应阶段,感染早期发挥作用参与非特异性免疫的效应阶段,感染早期发挥作用第二节补体总活性测定补体总活性测定方法是以红细胞的溶解为指示，以50%溶血为判断终点，称为CH50(50%complementhemolysis)应用不同的激活物可活化不同的补体途径基于经典途径的CP-CH50（临床常规项目）应用于C3旁路检测的AP-CH50（尚未列入检验常规）1、CH50测定法的原理在适当、稳定的反应系统中，溶血反应与补体的剂量依赖关系呈现“S”形曲线补体的剂量以引起50%溶血所需要的最小补体量为一个CH50U，可计算出待测血清中总的补体溶血活性，以CH50U/ml表示。22、、CH50CH50测定方法（以测定方法（以2.52.5ml反应体系为例）：）：2%绵羊红细胞2%绵羊红细胞1：20稀释待检血清稀释缓冲液（磷酸或巴比妥）2U溶血素2U溶血素1:11.50ml0.5ml0.5ml0.100.150.20…0.500.001.401.351.30…1.001.5037℃水浴箱中温育30min后2000r/min离心10min致敏红细胞2、试验结果判断2.5ml50%溶血标准管肉眼观察溶血程度肉眼观察溶血程度与之最相近的两管与之最相近的两管置于分光光度置于分光光度计计读读取取ODOD542542值值最接近标准最接近标准管管ODOD值的一管值的一管确定为补体最高反应确定为补体最高反应管管3、50%溶血的总补体值的计算CH50（U/ml）=11待检血清用量待检血清用量××稀释倍数稀释倍数注意：用CH50法测定总补体溶血活性时，所测的值与反应体积成反比例关系，一般以反应总体积2.5ml为常用，测得的总补体活性的参考范围为50~100U/ml举例举例血清补体总活性测定试管号1：20稀释待检血清巴比妥缓冲液2U溶血素2%SRBC眼观结果OD54110.101.400.500.50不溶血20.151.350.500.50不溶血30.201.300.500.50部分溶血1.567840.251.250.500.50大部分溶血1.678950.301.200.500.50全溶血………0.500.50全溶血90.501.000.500.50全溶血100.001.500.500.50不溶血50%溶血标准管的OD542=1.6610第4管为最高有效反应管CH50（U/ml）==110.250.25××2020=80=80表明：待测血清50%溶血的总补体值为80。（在2.5ml反应体系的总补体活性的参考范围50~100U/ml内）3、方法评价与临床意义方法简便、快速，但敏感性低，补体的活性除与反应体积成反比外，还与反应所用的缓冲液、SRBC的数量以及反应温度都有关。CH50增高见于：心肌梗死、甲状腺炎、大叶性肺炎、糖尿病、妊娠等CH50降低见于：严重肝病或不良时营养、细菌感染自身免疫病的诊断及动态检测第二节补体组分的检测常作为单个补体成分的检测指标：C3、C4、C1q、B因子和C1酯...