免疫学检测技术的基本原理及其应用VIP免费

免疫学检测技术的基本原理及其应用提要免疫学检测技术主要应用：对多种免疫性疾病的诊断、疗效评估、发病机制探讨;对抗原性物质、免疫细胞、细胞因子、粘附分子或细胞受体等的定性、定量检测。第一节抗原或抗体的检测抗原-抗体反应包括：沉淀反应、凝集反应、溶解反应、补体结合反应、中和反应等。抗原-抗体反应可用已知的特异性抗体检测未知的抗原；也可用已知的抗原检测未知的抗体。第一节抗原或抗体的检测免疫标记技术包括：免疫酶技术、免疫荧光技术、同位素标记技术、化学发光免疫技术、免疫胶体金技术等。抗原-抗体反应的特点：P226抗原-抗体的特异性结合。抗原抗体分子表面的非共价键结合。反应的两个阶段：特异性结合阶段；可见的反应阶段。是否呈现可见的反应现象，与抗原和抗体两者的分子浓度和比例密切相关。抗原抗体比例对反应现象的影响抗原-抗体反应的影响因素1.电解质：抗原-抗体反应通常应用0.85%的氯化钠（适当浓度的电解质）作为稀释液。2.温度：反应常在37℃水浴或孵育箱中进行。3.酸碱度：抗原-抗体反应适应的酸碱度为PH6-8。抗原抗体的检测方法凝集反应沉淀反应中和反应用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应凝集反应(Agglutination)细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合、凝集的现象。1、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法（定性试验）和试管法（半定量试验）。凝集反应(Agglutination)2、间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，形成致敏颗粒，与相应抗体反应出现的颗粒凝集现象。血球凝集沉淀反应（Precipitation)血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，称为沉淀反应。沉淀反应（Precipitation)沉淀反应可在液体中进行，如絮状沉淀。大多数沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为介质，进行琼脂扩散故也称免疫扩散。勇于开始，才能找到成功的路单向免疫扩散(SingleImmunodiffusion)•将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制琼脂板；打孔，将抗原加入孔中扩散。•抗原与抗体相遇，形成沉淀环，环的直径与抗原含量成正比。•常用于测定血清IgG、IgM、IgA和C3等的含量。含抗体的凝胶沉淀环勇于开始，才能找到成功的路双向免疫扩散（DoubleImmunodiffusion)•将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由扩散并相遇，在比例合适处形成沉淀线。•含两种以上的抗原抗体系统，可出现两条以上的沉淀线。•常用于抗原或抗体的定性、组成和两种抗原相关性分析的检测。勇于开始，才能找到成功的路免疫电泳（Immunoelectrophoresis)•将待测血清标本作琼脂凝胶电泳，不同分子量蛋白组分开，然后与电泳方向平行挖一小槽，加入相应的抗血清，与不同区带的蛋白抗原作双向免疫扩散，在各区带相应的位置形成沉淀弧。•常用于血清蛋白种类分析。火箭电泳（RocketElectrophoresis)也称免疫扩散，是把单向免疫扩散同电泳结合在一起的方法。抗原在含有定量抗体的琼脂中泳动，两者比例适宜时，在较短时间内生成锥形的沉淀峰。在一定浓度范围内，沉淀峰的高度与抗原含量成正比。特点：需时较短，用于快速沉淀标本中抗原含量的测定。火箭电泳示意图免疫标记技术用荧光素、同位素或酶等示踪物质标记抗体（或抗原）进行抗原-抗体反应。能极大地提高了反应的灵敏度，可以对微量物质进行定量、定性或定位检测。三种基本类型：免疫荧光技术、免疫酶技术和同位素标记技术。免疫荧光显微技术(ImmunofluorescenceTechnique)将荧光素（异硫氰酸荧光素，FITC、藻红蛋白，PE)与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本的抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出荧光，对标本中抗原的鉴定和定位。包括直接荧光法、间接荧光法和补体法。直接荧光法：将荧光素直接标记抗体作标本染色。优点：是特异性强。缺点：每检测一种抗原必须制备相应的荧光抗体。间接荧光法：用一抗与标本中的抗原结合，再用荧光素标记的二抗染色。优点：敏感性比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗可用于多种抗原的检测。补体结合免疫荧光法：在间接法的第一步...