优良菌种选育杂交育种•微生物优良生产菌种的特征•工业菌种的育种方针•自然突变选育•诱变选育•杂交育种细菌放线菌霉菌酵母菌•原生质体融合•基因工程技术优良菌种选育——要点4.3杂交育种杂交(hybridization)优点:•改变亲株的遗传物质基础,扩大变异范围,使两亲株的优良性状集中于重组体内,获得新品种。•丰富并促进遗传学理论的发展。1.选择原始亲本2.诱变筛选直接亲本3.直接亲本之间亲和力鉴定4.杂交5.筛选重组体6.重组体分析7.鉴定。《微生物杂交育种基本程序》亲本的选择亲本的标记和亲和力测定二倍体形成重组及重组体的分离原始亲本直接亲本《微生物杂交育种基本程序》1.原始亲本：具有不同遗传背景的优质出发菌株。2.直接亲本：具有遗传标记和亲和能力，直接用于杂交配对的菌株。《杂交过程中亲本的选择》原养型重组体，MM上生长《杂交育种的遗传标记》1、营养缺陷型标记其中A株为生物素、苯丙氨酸和半胱氨酸缺陷,B株为苏氨酸、亮氨酸和硫胺缺陷型。双亲本都不能在基本培养基上生长,但杂交后代基因重组后产生营养互补的原养型重组体可在基本培养基上生长2、抗性标记3、温度敏感性标记4、其他性状标记A株B株4.3杂交育种1.细菌2.放线菌3.霉菌4.酵母菌《细菌杂交方式》杂交方式供体与受体细胞关系参与交换的遗传物质接合Conjugation体细胞间暂时沟通部分染色体杂合转化Transformation细胞不接触,吸收游离DNA片断个别或少数基因杂合转导Transduction细胞间不接触,质粒、噬菌体介导个别或少数基因杂合•F因子：是一种质粒，存在与细胞质中，一般以游离状态，有时又和染色体以结合状态存在，是一种稳定的遗传物质。为环状DNA双链结构。上面有编码细菌产生性菌毛及控制接合过程进行的20多个基因。机制(大肠杆菌的接合机制)接合作用是由一种被称为F因子的质粒介导接合（Conjugation）“雄性”菌株（F+），“雌性”菌株（F-），有性菌毛F+接合（Conjugation）《杂交的方法，直接混合法》1.分别培养直接亲本菌株,至对数期2.离心，洗涤，加新鲜培养液3.混合，离心，放置：让亲本菌株间的染色体进行连接、交换和重组4.稀释，涂布于平皿5.筛选《杂交的方法，滤纸上混合》1.将两个直接亲本菌株,分别培养至对数期2.取同样量混合，过滤在滤膜上3.将滤膜（菌面朝上）平放在平板培养基上4.置于37℃培养,让亲本菌株间结合，染色体进行连接、交换和重组此法的效率比液体混合法效率高。4.3杂交育种1.细菌2.放线菌3.霉菌4.酵母菌２、放线菌的杂交育种基因重组过程近似细菌，育种方法与霉菌相似．放线菌的遗传体系和杂交原理：异核现象：同一细胞（菌丝）含不同基因型的染色体接合现象：发生部分染色体转移（交换），形成部分合子异核系的形成：部分合子产生的无性繁殖系。染色体融合能在基本培养基上生长重组体的形成：异核系不稳定。经过重组，分离，得到重组子部分合子异核系重组体染色体连接亲本分离子ABAB异核体异核现象混合培养《放线菌杂交过程》结合现象染色体重组分离《放线菌的杂交技术》放线菌杂交方法:(一)平板杂交法（测定亲和性）(二)混合培养法(三)玻璃纸法完全培养基影印《平板杂交法》大量菌株（A组）与一个共同试验菌株（B）进行杂交用来检测亲和性基本培养基+ApA组Ap-，phe+BAp+，phe-影印A组和B的重组体原养型重组体，MM上生长A株B株《混合培养法》和细菌一样玻璃纸：有微孔可以吸收玻璃纸下的营养《玻璃纸法》AAp-，phe+BAp+，phe-玻璃纸玻璃纸完全培养基基本培养基（Ap+）异核系在显微镜下收集异核系的菌丛重组体基本培养基4.3杂交育种1.细菌2.放线菌3.霉菌4.酵母菌３、霉菌的杂交育种《在固体培养基上的一些形态》•霉菌杂交育种是利用准性生殖过程中的基因重组和分离现象。•准性生殖过程：不通过有性生殖的基因重组过程。•将不同菌株的优良特性集合到一个新菌株中。•原理和技术和放线菌相似《霉菌杂交的原理和杂交技术》异核体的形成：两不同性状细胞（菌丝）连接，导致一细胞存在两个不同遗传型核。杂合二倍体形成；异核体偶尔发生不同核的融合，形成杂合核，为双倍体。体细胞重组：杂合二倍体只具有相对稳定性，繁殖过程发生染色体交换，单倍化，形成各种分离子。...
