生化综合性试验报告

本科学生综合性实验报告 学号 084120004 姓名 学院 生命科学学院 专业、班级 08 生科A 实验课程名称 生物化学综合实验 教师及职称 开课学期 2 0 0 9 至 2 0 1 0 学年 第一 学期 填报时间 2 0 0 9 年 1 2 月 2 1 日 云南师范大学教务处编印 一．实验设计方案实验序号 实验名称 酵母RNA 的提纯及其定性鉴定与定量测定 实验时间 实验室 1．实验目的： 1.1.学习生物大分子物质和提纯的基本原理、主要方法及步骤。 1.2.了解RNA 提取的几种常用方法并掌握浓盐法提取RNA 的原理和方法。 1.3.掌握两种定量测定和定性鉴定所得RNA 的原理和方法。 14.学习电泳技术的基本原理及其分类以及相关的应用。 1.5.学习离心技术在生物实验中的应用。 2．实验流程、实验原理： 2.1.实验流程： 酵母RNA 的提纯。 RNA 的定性鉴定及其定量测量。 2.2.实验原理： Ⅰ、提纯RNA 的基本原理： 细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。因此，提取RNA 时要把RNA 与蛋白质分离并除去。R N A 提制过程是：①使 RNA 从细胞中释放，将它与蛋白质分离，然后将菌体除去；②根据核酸在等电点时溶解度最小的性质，将 PH 制调到 2.0~2.5，使 RNA沉淀，进行离心收集。 Ⅱ、定性鉴定的基本原理： 一、RNA 基团鉴定： RNA 含有核糖，嘌呤、嘧啶碱和磷酸组分，叫硫酸煮沸可使其水解，用地衣酚，硝酸银以及定磷试剂可产生沉淀或者颜色反应以分别鉴定出核糖，嘌呤碱以及磷酸。 1、 核糖基团鉴定： 2、磷酸基团鉴定： 3、嘌呤碱基团鉴定： 4.核糖、磷酸、嘌呤碱基团鉴定反应： ①核糖 与浓盐酸共热后降解 糖醛 与地衣酚反应 鲜绿色复合物 ②RNA 与硫酸共热，水解 嘌呤碱 硝酸银 嘌呤银化物（白色或红棕色） ③RNA 与硫酸共热，水解 磷酸 钼酸铵试剂 磷钼酸铵沉淀（黄色） 二、电泳分离鉴定： 任何物质质点，由于其本身在溶液中的解离或是由于其表面对其他带电质点的吸附，会在电场中向一定的电极移动。一般来说，在碱性溶液中，分子带负电荷，在电场中向正极方向移动，而在酸性溶液中，分子带正电荷，在电场中向负极方向移动。电泳分为自由界电泳和区带电泳（现阶段主要的电泳方法），区别在于有无支持物。本实验选取的是用醋酸纤维素薄膜做支持物的电泳方法——醋酸纤维素电泳。 Ⅲ、定量测定的基本原理： 一、地衣酚法定量测定： 当 RNA 与浓盐酸供热时，即发...