CCK8的步骤

人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽（CCK-8）ELISA试剂盒说明书 本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断! 预期应用 ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中 CCK-8含量。 实验原理 用纯化的 CCK-8抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的 CCK-8抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物（TMB）显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 CCK-8呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（ 值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1、 酶标板：一块（96孔） 2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前 15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至 0.5ml，盖好后室温静置大约 10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为 50 pmol/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成 50 pmol/L，25 pmol/L，12.5 pmol/L，6.25 pmol/L，3.12 pmol/L，1.56 pmol/L，0.78 pmol/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 pmol/L。如配制 25 pmol/L标准品：取 0.3ml （不要少于0.3ml ）50 pmol/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的 Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3、 样品稀释液：1×20ml。 4、 检测稀释液A：1×10ml。 5、 检测稀释液B：1×10ml。 6、 检测溶液A：1×120 /瓶（1:100）。临用前以检测稀释液A 1:100稀释（如：10 检测溶液A / 990 检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100 /孔），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。 7、 检测溶液B：1×120 /瓶（1:100）。临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。 8、 底物溶液：1×10ml/瓶。 9、 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10、终止液：1×10ml/瓶（2 mol/L H2SO4）。 11、覆膜：5张 12、使用说明书：1份 自备物品 1、 酶标仪（建议仪器使用前提前预热） 2、 微量加液器及吸头，EP管 3、 蒸馏水或去离子水，滤纸 标本的采集及保存 1、 血清：全血标本请于室温放置 2小时或 4 过夜后于 1000 g离心 20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20 或-80 保存，但应避免反复冻融。 2、 血浆：可用 EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后 30分钟内于 1000 g离心 15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20 或-80 ...