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CCK8的步骤

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人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)ELISA试剂盒说明书 本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断! 预期应用 ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中 CCK-8含量。 实验原理 用纯化的 CCK-8抗体包被微孔板,制成固相载体,往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的 CCK-8抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 CCK-8呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度( 值),计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1、 酶标板:一块(96孔) 2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前 15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至 0.5ml,盖好后室温静置大约 10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为 50 pmol/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成 50 pmol/L,25 pmol/L,12.5 pmol/L,6.25 pmol/L,3.12 pmol/L,1.56 pmol/L,0.78 pmol/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 pmol/L。如配制 25 pmol/L标准品:取 0.3ml (不要少于0.3ml )50 pmol/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的 Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。 3、 样品稀释液:1×20ml。 4、 检测稀释液A:1×10ml。 5、 检测稀释液B:1×10ml。 6、 检测溶液A:1×120 /瓶(1:100)。临用前以检测稀释液A 1:100稀释(如:10 检测溶液A / 990 检测稀释液A),充分混匀,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100 /孔),实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。 7、 检测溶液B:1×120 /瓶(1:100)。临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。 8、 底物溶液:1×10ml/瓶。 9、 浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10、终止液:1×10ml/瓶(2 mol/L H2SO4)。 11、覆膜:5张 12、使用说明书:1份 自备物品 1、 酶标仪(建议仪器使用前提前预热) 2、 微量加液器及吸头,EP管 3、 蒸馏水或去离子水,滤纸 标本的采集及保存 1、 血清:全血标本请于室温放置 2小时或 4 过夜后于 1000 g离心 20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20 或-80 保存,但应避免反复冻融。 2、 血浆:可用 EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后 30分钟内于 1000 g离心 15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20 或-80 ...

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