流式细胞仪检测细胞周期操作步骤取对数生长期的 A549 细胞，按 1X106cells/mL 以 1mL 接种于 100mm培养皿内!24h 后，进行所需的处理（比如加药,照射）!特定时间后终止培养，进行下一步的实验!收集原培养液，洗后的 PBS 和消化后的细胞，将三者混匀放入 15ml离心管中!1000rpm 离心 5min（短时低速离心）!弃上清，用 1.5ml 预冷 PBS，1000rpm 离心 5min 后去除 PBS 和细胞悬液内的细胞碎片!加入 1.5ml 预冷 PBS,在涡旋状态下加入 3.5ml 无水乙醇，混匀后，于 4°C 固定 30min,或-20°C 长期保存。1000r/min,离心 5min将乙醇吸除，加 PBS 清洗混匀I1000r/min,5min 再离心一遍，将残留在细胞上的乙醇除去I吸除离心管内 PBS，加入 200ulPBS 和 2ul 的 RNA 酶（0.25mg/ml）（37°C 下孵育 30min）I加入 0.5ml 的 50ug/ml 的 PI 溶液室温下避光染色 30minI将离心管内的细胞过滤（300um 尼龙网膜）至含有 PBS 的 EP 管中（PI 具有很强的粘附性，容易使细胞聚团），标记 EP 管I提前一天网上预约I开机（先开仪器后开软件）I流式细胞仪的结构一般分为 5 部分：①流动室及液流驱动系统；②激光光源及光束成形系统；③光学系统；④信号检测、存贮、显示、分析系统；⑤细胞分选系统。I检测前先涡旋使细胞混匀悬浮呈单个细胞，然后插入流式细胞仪上结果分析Modfit流动室内充满鞘液，细胞排成单列由喷嘴中心喷出，形成细胞液柱!液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光（488nm 激发光源）!荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析（荧光染料和细胞DNA 分子特异性结合，可以检测出细胞周期各时相细胞比例）!在用第三方软件分析之前，将流式结果按如下所示导出AUOIFL^IFCHFiletJlEInkriflLMVtfQFl4NriMdqi^|ri4-QAj.^ulrsDiporiFa-pnrtFC^EwiwrlL>MH^dspF^pe-sehipi.-p'JIlitp»fe"l 刊Mrtt.iiarftfQuiietHtq^EJi-UEEL结果分析ModfitI 五 g 皿 Tcoiiili«3►JiLri4 町 n>—冲 mI»«H#p割勺更劄工庖出劉詮|両厂Flowjo 软件分析■；I-M&IFI|J*tflKISS：311-IHRFdfSMC-2JI!-—yvH!"4-ifinF图片拷贝：直接 Ctrl+CJIhnberofSoapier{,}AllS-amplM{:}2013^20814]fari«SlatLEtitKills'J20130520a-1.FCG39512^2D13O'32Oa-2.fn15906j2D13Q621]a-3.fCS43^6j?ono52Ja-J.rcs12441,i20130^20a-5.rcs15072"2Dna520a-6.^3^700J2D13J36203-7.rt331317JEWUM.Pa-SIcs2fl±54U20130620a-9.fc5315-...
