GST蛋白纯化

GST bestarose 4FF 说明书 默认分类 2010-01-18 09:32:34 阅读 257 评论 0 字号：大中小 GST bestarose 4FF 是专门用于纯化 pGEX 系列载体表达的 GST 标签蛋白，其它谷胱甘肽转移酶以及与谷胱甘肽有亲和作用蛋白的分离介质，操作简单，快速。 GST bestarose 4FF 可直接从预处理的细胞裂解物中纯化 GST-tagged 蛋白，纯化条件温和，可以保证蛋白的生物活性。 GST bestarose 4FF 具有高流动性，易于放大，GST bestarose 4FF 有快速方便的预装柱，Ez -Fast bestarose 4FF 1ml 和 5ml。 介质性能 谷胱甘肽是通过 10 碳原子的连接臂偶联到 4%高度交联的琼脂糖上。最优的偶联作用使介质具有高GST-tagged蛋白及与谷胱甘肽相互作用蛋白的结合能力。 总的蛋白结合能力约为每毫升填料结合10mg 标签蛋白，动态结合能力随着外界因素改变，如不同的目标蛋白，流速等等。 如果需要去除GST 部分（天然蛋白分子量为 26KD），当蛋白吸附在柱上，或在洗脱后用位点专一的蛋白酶消化，选用前种方法，可减少额外分离目的蛋白与 GST 步骤，消化后，目的蛋白直接用结合液洗脱即可。 表 1 GST bestarose 4FF 性能 配体 谷胱甘肽与 10 碳原子连接臂 配体浓度 120-320μmol 谷胱甘肽/ml 填料 蛋白结合能力 ≈ 10mg 重组GST-tagged 蛋白/ml 填料，GST，Mr26000 动态结合能力 ≈11mgGST-tagged 蛋白/ml 填料，Mr43000 平均颗粒大小 90μm 组成 4%高度交联的琼脂糖 最大流速* 450cm/h（15ml/min），XK 层析柱，柱高 5cm,水溶性缓冲液，室温纯化 建议的流速** 上样：＜100cm/h（＜3ml/min ，XK 层析柱） 洗涤与洗脱：100-300cm/h（3-10ml/min，XK 层析柱） 化学稳定性 所有常用的水溶性缓冲液中稳定，如：1M 醋酸盐，pH7.4，6M 盐酸胍，室温，1h pH 稳定性 pH3-12 贮存温度 +4-30℃ 贮存液 20%乙醇 * 水是室温的。 ** 结合力与流速有关，低流速增加结合量，这在上样和洗脱过程中非常重要。蛋白性质，pH，温度也影响结合量。 试剂配制 缓冲液的配制： 用来配缓冲液的水及化学试剂纯度要求很高，建议试剂配好后，用0.45μm 滤膜过滤。 结合液：PBS，pH7.3（140mM NaCl，2.7mM KCl，10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4，pH7.3） 洗脱液：50mM Tris-HCl，10mM 还原性谷胱甘肽，pH8.0） 注意：结合液和洗脱液中可以含有 1-10mM DTT。 样品的准备：上样前，样品需离...