核酸检测基本知识1•什么是核酸检测核酸的定义：核酸是由核苷酸或脱氧核苷酸通过 3，,5!-磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子。核酸具有非常重要的生物功能，主要是贮存遗传信息和3。核酸的组成fiibott■Q心；RNAtugarBaserinded)■PtwiphQdiesterlinkd^KFh仍phmie,二 groupRNDNA 和 RNA 都是由一个一个核苷酸(nucleotide)头尾相连而形成的，由 C、H、0、N、P,5 种元素组成。DNA 是绝大多数生物的遗传物质，RNA 是少数不含 DNA 的病毒(如 HIV 病毒，流感病毒，SARS 病毒等)的遗传物质。RNA 平均长度大约为 2000DNA(doubtt-slrjnded}DeflxyirilwjesugarPhCnphilegroup个核苷酸，而人的 DNA 却是很长的，约有 3X10V 个核苷酸。4.核酸的功能在蛋白质的复制和合成中起着储存和传递遗传信息的作用。核酸不仅是基本的遗传物质，而且在蛋白质的生物合成上也占重要位置，因而在生长、遗传、变异等一系列重大生命现象中起决定性的作用。DNA 与 RNA 都是核酸，它们在化学组成上有什么区别如下：DNA 与 RNA 的比较DNARNA主要存在部位细胞核细胞质基本组成单位脱氧核苷酸核糖核苷酸碱基种类A、G、C、TA、G、C、U五碳糖种类脱氧核糖核糖核苷酸链两条脱氧核苷酸链一条核糖核苷酸链5。检测方法核酸检测方法，主要通过同时进行靶核酸扩增和可检测信号的生成来检测样品中的靶核酸.可应用于临床微生物学、血液筛选、遗传病诊断和预防、法医学等领域的核酸检测。目前主要使用的方法有以下几种:a。核酸序列依赖性扩增法NASBA 是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异性核苷酸序列等温扩增 RNA 的新技术。反应在 421 进行，可在 2h内将 RNA 模板扩增约 109 倍。NASBA 原理是提取病毒 RNA,加入AMV 逆转录酶、RNA 酶 H、T7RNA 聚合酶和引物进行扩增。整个反应分非循环相和循环相：在非循环相中，引物 I 与模板 RNA退火后在 AMV 逆转录酶的作用下合成 cDNA,形成 RNA：DNA 杂合体，随即 RNaseH 降解 RNA,引物 II 与 cDNA 退火,在反转录酶作用下合成第 2 条 DNA 互补链。双链 DNA 可在 T7RNA 聚合酶的作用下，经其启动子序列起动而转录 RNA,RNA 又可在反转录酶的作用下反转录成 DNA,进入循环相，对模板进行大量扩增。b。转录介导的扩增技术TMA 技术原理与 NASBA 基本一致，略有不同之处是 TMA 利用的是 MMLV 逆转录酶及 T7RNA 聚合酶两种酶，MMLV 逆转录酶既有逆转录酶的活性又具有 RNA ...
