HE 染色 试剂配置 A:0.5~ 1%的伊红酒精溶液: 称取伊红Y0.5~1g,加少量蒸馏水溶解后,再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤,将滤渣在烘箱中烤干后,以95%酒精(即工业酒精,如果不怕浪费,用无水乙醇配制也可)100 毫升溶解。 B:苏木素染液配方:(配制3000ml,可按比列减少) 苏木精6g 无水乙醇100ml 硫酸铝钾150g 蒸馏水2000ml 碘酸钠1.2g 冰醋酸120ml 甘油900ml 配制方法:将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝钾溶于蒸馏水,溶解后将甘油倾入一起混合,最后加入冰醋酸和碘酸钠。 C:1%盐酸酒精分化液:将1 毫升浓盐酸加入99 毫升70%酒精中即可。 染色流程 (1)二甲苯(Ⅰ)15min (2)二甲苯(Ⅱ)15min (3)二甲苯:无水乙醇=1:12min (4)100%乙醇(Ⅰ)5min (5)100%乙醇(Ⅱ)5min (6)80%乙醇5min (7)蒸馏水5min (8)苏木精液染色5min (9)流水稍洗去苏木精液1-3s (10)1%盐酸乙醇1-3s (11)稍水洗 10-30s (12)蒸馏水过洗 1-2s (13)0.5%伊红液染色1-3min (14)蒸馏水稍洗 1-2s (15)80%乙醇稍洗 1-2s (16)95%乙醇(Ⅰ)2-3s (17)95%乙醇(Ⅱ)3-5s (18)无水乙醇5-10min (19)石炭酸二甲苯5-10min (20)二甲苯(Ⅰ)2min (21)二甲苯(Ⅱ)2min (22)二甲苯(Ⅲ)2min (23)中性树胶封固 注:①第(11)、(12)步可省去,(13)步冲水时间需延长至20-30min。 ②第(21)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇。 *冷冻切片HE 染色步骤: (1)冰冻切片固定10~30s (2)稍水洗1~2s (3)苏木精液染色(60℃)30~60s (4)流水洗去苏木精液5~10s (5)1%盐酸乙醇1~3s (6)稍水洗1~2s (7)促蓝液返蓝 5~10s (8)流水冲洗15~30s (9)0.5%曙红液染色30~60s (10)蒸馏水稍洗1~2s (11)80%乙醇1~2s (12)95%乙醇1~2s (13)无水乙醇1~2s (14)石炭酸二甲苯2~3s (15)二甲苯(Ⅰ)2~3s (16)二甲苯(Ⅱ)2~3s (17)中性树胶封固。 注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇。 染色结果:细胞核蓝色,胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。 4.12 切片脱水透明切片经 HE 染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色。切片1-2 级无水乙醇脱水,也可使用石碳酸二甲苯进行脱水。石碳酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去...