IGY提纯与鉴定

试 验 抗日本血吸虫卵黄抗体的制备与鉴定 材料与方法 1 .1 主要试剂 正辛酸 天津市弗晨化学试剂厂 批号200101（分析纯） 硫酸铵 天津市四通化工厂（分析纯） 3,3’,5,5’-四甲基联苯胺（TMB） Amresco 批号T2007/10 二甲基亚砜（DMSO） 郑州化学试剂厂 批号20030224 十二烷基磺酸（SDS） 北京鼎国生物技术公司 Sigma 进口分装 L5750 丙烯酰胺 沃德赛斯生物技术有限公司Sigma 进口分装A8887 羊抗鸡IgY（FITC 标记） Promega 公司 低分子量标准蛋白质 中科院上海生物化学研究所 DAB Amresco C069 DTT Genview DH116-2 1 .2 试剂的配制 1.2.1 提取蛋白用试剂的配制 （1）饱和硫酸铵溶液 (NH4)2SO4 760g， 蒸馏水（50～80℃） 1000mL 搅拌溶解 20 分钟，趁热过滤冷却后以浓氨水（NH3·H2O）调 PH 至 7.0～7.4，配制好的饱和硫酸铵置 4℃处置 30 min 以上，瓶底应有结晶析出，用时应置室温平衡后再用。 （2）醋酸缓冲液（0.06M,pH4.8） 醋酸钠 4.082g 冰乙酸 1.815g（约 1.7 mL ） 1.2.1 ELISA 用试剂 （1）包被液（0.05M pH9.6 碳酸钠缓冲液） 无水Na2CO3 1.59g NaHCO3 2.93g 蒸馏水加至 1000 mL （2）洗涤液（0.01M pH7.4 磷酸盐缓冲液）PBST NaCL 8.0g KCL 0.2g KH2PO4 0.2g Na2HPO4•12H2O 2.9g 吐温-20 0.5mL 蒸馏水加至1000 mL （3）封闭液（1% BSA－PBST） 牛血清白蛋白（BSA） 1g 洗涤液 PBST 100mL （4）底物缓冲液（pH5.0 柠檬酸-磷酸缓冲液） 0.1M 柠檬酸 (19.2g/L) 24.3mL 0.2M Na2HPO4 (28.4g/L) 25.7mL 蒸馏水 50mL （5）TMB 底物使用液 TMB 储存液（100mg 溶于 10mLDMSO,4℃保存） 100µL 底物缓冲液 10mL 30%H2O2 10µL （临用新鲜配制） （6）终止液（2M H2SO4） H2SO4（96%） 22.2mL 蒸馏水 177.8mL 1.2.3 SDS-PAGE 电泳用试剂 (1)10%（w/v）SDS 溶液 十二烷基硫酸钠（SDS） 10g 蒸馏水 100mL （室温保存） (2)10%（w/v）过硫酸铵（AP） 过硫酸铵 1g 蒸馏水 10mL （临用前新鲜配制, 4℃保存＜1 周） （3）30%丙烯酰胺混合液 丙烯酰胺 29.2g 二甲基双丙烯酰胺 0.8g 蒸馏水定容至100mL，棕色瓶4℃贮存 （4）分离胶缓冲液（1.5M pH8.8Tris-HCl） Tris 18.2g 少量蒸馏水溶解 HCl（1M） 调 pH 至8.8 蒸馏水定容至100mL，4℃贮存 （5）浓缩胶缓冲液（1.0M pH6.8T...