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Illumina_HiSeq_2000BGI

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Illumina HiSeq 2000 Illumina Hiseq 2000 测序系统是一种高通量测序技术,其测序原理和Illumina Genome Analyzer II测序系统相似,仍然是采用可逆终止法的边合成边测序技术。 这种测序技术通过将基因组DNA 的随机片断附着到光学透明的表面,这些DNA 片断通过延长和桥梁扩增,形成了具有数以亿计cluster 的 Flowcell,每个cluster 具有约1000 拷贝的相同DNA 模板,然后用4种末端被封闭的不同荧光标记的碱基进行边合成边测序。这种新方法确保了高精确度和真实的一个碱基接一个碱基的测序,排除了序列方面的特殊错误,能够测序同聚物和重复序列。 这种技术避免了像传统测序技术那样耗费大量人力、物力进行片段克隆、转化、质粒抽提等繁琐的操作。而且多种样品制备方法使此技术有一系列的广泛应用,包括基因表达、小RNA 的发现,蛋白质核酸相互作用等。 HiSeq 2000 测序系统是前所未有的高通量测序系统,不仅提高测序通量,降低了成本,而且具有创新的用户体验。预先配置、即插即用的试剂,简单的流动槽上样,简单的触摸屏用户界面,这种人机交互设计特征以及轻松的测序流程,使操作更简单,更方便。 HIseq 2000 cBot Flowcell Cluster Image 测序实验流程: • 基因组DNA 打断; • DNA 末端修复; • 连接接头; • DNA 片段杂交到 Flowcell 上; • DNA 模板延伸,桥式扩增; • Flowcell 制备; • SBS( synthesis-based-sequenceing)边合成边测序; • Hiseq 上自动化测序; • 图片处理,实时分析,碱基识别; • 图片实时分析; • 变异分析; • 总结报告; 技术特点: • 每个run 平均达到200G 的数据通量,读长为2 x 100bp; • 每个run 可同时运行2 张 Flow cell, 且每张Flow cell 可进行上下两面扫描; • 采用TDI 线性扫描技术,4 个相机同时扫描; • 预先配置、即插即用的试剂,简单的流动槽上样,触摸屏式的用户界面; • 低成本:单次运行即可以~30 倍的覆盖度同时对两个人类基因组样品进行测序,或同时绘制 200 个基因表达谱。 Illumina Hiseq 2000 能够对基因组DNA 片段大规模高通量并行测序,实验时将基因组或大片段DNA随机打断成<700 bp 的小片段(主带可为200bp、 300bp、 500bp 等),加上特定接头做成DNA 文库后直接对 DNA 片段进行单末端(Single-End)或者双末端(Paired-End)测序,不需要克隆到细菌中,可以...

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