精品文档---下载后可任意编辑鸡传染性支气管炎病毒(793/B)M 基因与截短 M 基因的克隆测序、原核表达及鉴定的开题报告题目：鸡传染性支气管炎病毒(793/B)M 基因与截短 M 基因的克隆测序、原核表达及鉴定背景：鸡传染性支气管炎病毒( infectious bronchitis virus, IBV)是一种严重危害畜牧业的病毒，属于冠状病毒科(Coronaviridae)，病毒粒子为球形，直径 60-220nm,病毒基因组为 ssRNA，全长为 27-32 kb，在病毒基因组中，M 基因编码的蛋白是负责病毒囊壳组装的重要蛋白，也是诱导机体免疫应答的重要抗原。根据之前的讨论，不同 IBV 菌株的 M 基因序列差异很大。讨论目的：本讨论旨在克隆鸡传染性支气管炎病毒(793/B)的 M 基因和截短 M基因，并进行原核表达和鉴定，为他后续讨论提供基础数据。讨论内容：1. 采纳 RT-PCR 技术，从鸡传染性支气管炎病毒(793/B)的 RNA 中扩增出 M 基因以及截短 M 基因序列。2. 将扩增后的 M 基因和截短 M 基因序列克隆至表达载体 pET-28a(+)中，然后将表达载体转化至大肠杆菌 BL21 (DE3)感受态细胞中进行原核表达。3. 蛋白的表达进行 SDS-PAGE 凝胶电泳分析，并利用 Western blot 检测蛋白的免疫反应性，检测克隆出来的蛋白。4. 纯化得到的蛋白进行质谱分析和生物学活性鉴定，了解 M 基因和截短 M 基因蛋白的结构和功能特性。讨论意义：通过克隆 IBV 的 M 基因和截短 M 基因并进行原核表达和鉴定，可以为后续的病毒结构和功能讨论提供数据支持。同时，对于克隆和表达其它病毒蛋白也能提供参考和借鉴价值。
