介导性shRNA 能抑制肺癌细胞中livin 沉默基因的表达从而促进SGC-7901 细胞凋亡 背景—由于肿瘤细胞抑制凋亡增殖,特定凋亡的抑制因素会对于发展新的治疗策略提供一个合理途径。Liv in 是一种凋亡抑制蛋白家族成员，在多种恶性肿瘤的表达中具有意义。但是, 在有关胃癌方面没有可利用的数据。在本研究中,我们发现liv in 基因在人类胃癌中的表达并调查了介导的shRNA 能抑制肺癌细胞中liv in 沉默基因的表达，从而促进SGC-7901 细胞凋亡。 方法—mRNA 及蛋白质liv in 基因的表达用逆转录聚合酶链反应技术及西方吸干化验进行了分析。小干扰RNA 真核表达载体具体到liv in 基因采用基因重组、测序核酸。然后用Lipofectamin2000 转染进入 SGC-7901 细胞。逆转录聚合酶链反应技术和西方吸干化验用来验证的liv in 基因在SGC-7901 细胞中使沉默基因生效。所得到的稳定的复制品用G418 来筛选。细胞凋亡用应用流式细胞仪(FCM)来评估。细胞生长状态和 5-FU 的50%抑制浓度(IC50)和顺铂都由MTT 比色法来决定。 结果—liv in mRNA 和蛋白质的表达检测 40 例中有19 例(47.5%)有胃癌和SGC-7901 细胞。没有liv in 基因表达的是在肿瘤邻近组织和良性胃溃疡病灶。相关发现在liv in 基因的表达和肿瘤的微小分化和淋巴结转移一样(P < 0.05)。4 个小干扰RNA 真核表达矢量具体到基因重组的liv in 基因建立。其中之一,能有效地减少 liv in 基因的表达,抑制基因不少于70%(P < 0.01)。重组的质粒被提取和转染到胃癌细胞。G418 筛选所得到的稳定的复制品被放大讲究。当 liv in 基因沉默,胃癌细胞的生殖活动明显低于对照组(P < 0.05)。研究还表明,IC50 上的5-Fu 和顺铂在胃癌细胞的治疗上是通过 shRNA 减少以及刺激这些细胞(5-Fu proapoptotic 和顺铂)(P < 0.01)。 结论—liv in 基因在胃癌中的过分表达与肿瘤分化与淋巴结转移建立联系,建议了治疗胃癌病例分子预后因素之一。ShRNA 可以抑制在SGC-7901 细胞中的liv in 基因表达,诱导细胞凋亡。Liv in 可以作为治疗胃癌凋亡的新目标。 1．介绍 胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一。大多数患者被诊断为这个疾病的阶段,在最佳时间的机会错失了手术治愈。尽管有很大改善,但处于晚期胃癌的化疗患者的总体存活率仍然很低。癌症细胞化疗耐抗性可能导致手术失败。在耐药的原因中,抑制细胞凋亡的过程会起重要作用。癌细胞常有抗凋亡增长的特征[1],介导其增加的...
