报告基因 Promega中文通讯 第2期 2002 荧光素酶 双荧光素酶报告基因测试∶ 结合萤火虫和海洋腔肠荧光素酶先进的共报告基因测试技术 在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ,通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因(比如 CAT,β -Gal,GUS)不够便利,因为各自的测试化学,处理要求,检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术,结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因测试系统,结合 pRL载体系统,表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶,在单管中进行双荧光素酶报告基因测试,快速,灵敏,简便。系统还提供 PLB裂解液,用来裂解在多孔板中培养的哺乳细胞,不需操作单个样品。对于正在使用萤火虫荧光素酶报告基因载体的研究人员。双荧光素酶报告基因测试系统将使他们立即体会到该系统的便利。 介 绍 双报告基因用于实验系统中作相关的或成比例的检测, 通常一个报告基因作为内对照, 使另一个报告基因的检测均一化。检测基因表达时双报告基因通常用来瞬时转染培养细胞，带有实验报告基因的载体共转染带有不同的报告基因作为对照的第二个载体。通常实验报告基因偶联到调控的启动子, 研究调控基因的结构和生理基础。报告基因表达活力的相对改变与偶联调控启动子转录活力的改变相关，偶联到组成型 启动子的第二个报告基因，提供转录活力的内对照, 使测试不被 实验条 件 变化所 干 扰 。 通过 这 种方 法 , 可 减少内在的变化因素所 削 弱 的实验准 确 性 , 比如, 培养细胞的数 目 和活力的差别 , 细胞转染和裂解的效 率 。 使用萤火虫荧光素酶,结合氯 霉 素乙 酰 转移 酶(CAT), β -半 乳糖 苷 酶(β -Gal), 或葡 萄 醛 酸糖 苷 酶(GUS)的双报告基因,近 几 年 已 普 遍 使用。但这 些 双报告基因组合削 弱 了荧光 素酶操作的优 势 , 比如荧光素酶测试和定量可 在几 秒 钟 内进行, 但 CAT, β -Gal和 GUS测试法 , 则 在定量前 需要长 时间 的保 温 。另外 ,这 些 报告基因受 限 于它 们的灵敏度 和线 性 应 答 范 围 , 必 须 注 意 不要超 过 这 些 范 围 , 内源 性 细胞活力也 会干 扰 这 类 报告基因的使用。许 多类 型 的细胞有内源 β -Gal或GUS表达, 不利于准 确 定量报告基因表达, 胞内去 乙 酰 酶活力干 扰 CAT活力测试。尽 管在高 温下预处...
