反相色谱柱的使用与维护 反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18 柱,其它常用的反相柱还有C8,C4,C2 和苯基柱等
另外还有离子交换柱,GPC 柱,聚合物填料柱等
本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用: 一、反相色谱柱的选择 1.柱子的PH 值使用范围 反相柱优点是固定相稳定,应用广泛,可使用多种溶剂
但硅胶为基质的填料,使用时一定要注意流动相的PH 范围
一般的C18 柱PH 值范围都在2-8,流动相的PH 值小于 2时,会导致键合相的水解;当 PH 值大于 7 时硅胶易溶解;经常使用缓冲液固定相要降解
一旦发生上述情况,色谱柱人口处会塌陷
同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同
如果流动相PH 较高或经常使用缓冲液时,建议选择PH 范围大的柱子,例如戴安公司的Acclaim 柱PH 2-9 或 Zorbax的PH 2-11
2.填料的端基封尾(或称封口) 把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾,可改善对极性化合物的吸附或拖尾;含碳量增高了,有利于不易保留化合物的分离;填料稳定性好了,组分的保留时间重现性就好
如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物,最好选用填料经端基封尾的色谱柱
二、液相色谱柱的使用 色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考
在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性
但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同
1、样品的前处理 a、最好使用流动相溶解样品
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不 可逆吸附的杂质
c、使用 0
45µm 的过滤膜过滤除去微粒杂质
2、流动相的配制 液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到