精品文档---下载后可任意编辑MMPs 介导的肿瘤靶向性 rhTNF-α 融合蛋白表达纯化及其生物学活性讨论的开题报告一、讨论背景实验室之前的讨论发现，肿瘤组织中的 MMPs（matrix metalloproteinases，基质金属蛋白酶）水平明显升高，并引起了肿瘤的侵袭和转移，因此 MMPs 已成为肿瘤治疗讨论的新领域。而人类肿瘤坏死因子 α（TNF-α）是一种重要的免疫调节分子，能够参加多种生物学过程，如细胞凋亡、炎症、病毒清除和肿瘤抗体依赖性细胞介导细胞毒性等。但是，TNF-α 单独应用时可能会引起副作用，如高热、低血压、皮肤炎、休克等。因此，在将 TNF-α 用于临床治疗中，需要同时考虑降低其副作用和提高其肿瘤靶向性。近年来，讨论人员利用 MMPs 依赖性基质降解过程构建了一种新型的 TNF-α 靶向融合蛋白。此蛋白在正常组织中无法释放，只有在 MMPs水平升高的肿瘤组织中才能够被 MMPs 切割释放出来，从而发挥抗肿瘤作用。然而，对于这种融合蛋白的生物学活性和纯化方法等问题还需要深化讨论。二、讨论目的本讨论旨在构建一种肿瘤靶向性 rhTNF-α/MMPs 融合蛋白，并对其进行表达纯化及生物学活性鉴定，为该融合蛋白的进一步应用提供实验基础。三、讨论内容及方法1.构建肿瘤靶向性 rhTNF-α/MMPs 融合蛋白的基因序列；2.将基因序列克隆至表达载体中，进行原核表达体系的构建和优化；3.通过 IPTG 诱导，利用 Ni-NTA 亲和柱法对融合蛋白进行表达纯化，并进行 SDS-PAGE 凝胶电泳和 Western blot 检测；4.对纯化得到的融合蛋白进行生物学活性鉴定，包括细胞增殖、凋亡和肿瘤细胞迁移等实验。四、预期结果1.成功构建肿瘤靶向性 rhTNF-α/MMPs 融合蛋白基因序列并进行原核表达体系构建；精品文档---下载后可任意编辑2.成功表达纯化肿瘤靶向性 rhTNF-α/MMPs 融合蛋白，并对其进行质量和活性检测；3.肿瘤靶向性 rhTNF-α/MMPs 融合蛋白将具有较好的抗肿瘤生物学活性。
