各种DNA提取方法

各种 D N A 提取方法提取方法提取方法提取方法 一，基因组 D N A 提取方法 制备基因组 DNA 是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于 100-200kb。在 DNA 提取过程中应尽量避免使 DNA 断裂和降解的各种因素，以保证DNA 的完整性，为后续的实验打下基础。主要是 CTAB 方法，其他的方法还有 1 物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。2 化学方式：异硫氰酸胍法碱裂解法 3 生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等 试验步骤： 1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。 2、细胞重悬于冰冷的 PBS 漂洗一次，离 心收 集。 试验 步骤 2 再重新作一 边。 3 、加入5mlDNA 提 取缓冲液，(10mmol/LTris-cl0.1mol/LEDTAo.5%SDS)混匀。 4、加入25ul 蛋白酶 K 使终浓度达到100ug/ml 混匀，50℃水浴 3h 5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm 离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min 离心收集水相 6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。加入等体积的 5mol/L 的 LiCL 混匀，冰浴，10min.。 7、2500rpm 离心 10min.转上清于一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温 10min。2500rpm 离心 10min。弃上清。 8、加入0.1 倍体积 3mol/L 乙酸钠(PH5.2)与 2 倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20min。 9、12000r/min 室温离心 5min。弃上清。将 DNA 溶于适量 TE 中。 二，外周血 D N A 提取技术 分离外周血白细胞提取方法： 试验步骤： 1、取人肘静脉血 5ml，EDTA 抗凝，2500rpm离心 10min。 2、小心吸取上层血浆，分装到 3 个 0.5ml 离心管中。 3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴 15min。 4、2500rpm 离心 10min，弃上清。 5、加入10ml 溶血液，摇匀，冰浴 15min。 6、3000rpm 离心 10min，弃上清。 7、倒置离心管，去掉残液。 8、得白细胞，－80℃冻存。 试验要求： 血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过 2h，4℃放置不超过 5h，以防白细胞自溶。 三，氯仿法抽提外周血白细胞基因组 D N A ： 试 验 试 剂 ： Ligsisbuffer ： 133mM NH4Cl NHCl7.12g0.9mMNH4HCO3NH4HCO30.071g0.1mMEDTA0.5mMEDTA0.2ml；最后加灭菌去离子水至 1000ml，高压灭菌。ACD 抗凝剂：__________柠檬酸 1.68g 柠檬酸钠 4.62g 葡萄糖5.15g；最后加灭菌去离子水...