HePG2 细胞和 L-02 细胞的传代：HePG2 细胞属人肝肿瘤的恒生细胞株，L-02 细胞则是人胎肝细胞株，二者所使用的培养基可以是一样的，即最常见的 DMEM。一干使用低糖的。 细胞长满培养瓶时既要传代。使用胰酶消化即可。用 D-Hank's 液配制成 0.25%的胰酶。使用前 37 度预热，细胞经 PBS清洗两遍后，每个中号培养瓶加 0.7ml 的胰酶，胰酶的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶以后，为使酶的活性最大，将培养瓶盖拧紧后放回培养箱中，3 分钟左右即用含血清的培养基终止消化。如果在室温情况下消化，时间相应加长，可以在显微镜下观察，当细胞界限已十分清楚，即已分离为单个细胞，且有少量细胞漂起，则要终止消化了。 16HBE 细胞株的传代方法： 镜下观察细胞生长融合达70-80%，准备传代。常规开紫外照射超净台20 分钟，同时把含 10%胎牛血清的 MEM 培养基、0。25%胰酶、PBS 放置 37 度培养箱中孵育。20 分钟后开始传代。先弃掉旧培养液，加 PBS 洗一次，然后加 0。25%胰酶 2ml 消化（指 25 乘 25cm 大小的培养瓶）细胞，镜下观察细胞，细胞突起回缩，细胞变圆，然后将培养瓶放置 37度二氧化碳培养箱中孵育 3 分钟左右（当然时间是随机的，比如：新配的胰酶作用时间短一些，配制时间长的胰酶作用时间会长一些，当然要不断地镜下观察），待细胞大部分消化下来（大部分细胞呈流沙状脱离瓶壁），加 4ml 含 10%胎牛血清的 MEM 培养基终止消化。反复吹打瓶壁上残留的细胞，并将已消化下来的细胞吹打均匀，然后吸入离心管中 1000转离心 1 分钟，然后弃掉上清，用手指将离心管中的细胞弹打均匀，加新培养基，吹打均匀，分至 3 个新的培养瓶中，补足培养液。将培养瓶平放，小心移入 37 度二氧化碳培养箱中培养过夜。次日观察。 胃癌细胞 AGS 和 SGC-7901 的培养：细胞传代时不能长的太满,70%-80%就可以传了.实验前先把紫外灯打开照30 分钟,然后再把鼓风机开10 分钟,同时把培养液和胰酶放入 37 度水浴箱中,千万记住不要盖上水浴箱的盖子.传代时,我一般把培养瓶口过一下火,就直接把培养液到去,再用 0.25%的胰酶(不含 EDTA)消化.等细胞变圆,细胞间空隙加大就直接把培养液到去,不用离心,然后再吹打,虽说要轻柔,但很难吹打成单细胞悬液,所以稍用力也没有关系.虽然操作不规范,但节省时间,细胞也没有被污染. AAV-293 细胞的传代: AAV-293 细胞较喜欢成团生长,比较娇嫩,...
