精品文档---下载后可任意编辑PUMA-BH3 28 肽基因工程菌的构建及其抗肿瘤活性讨论的开题报告开题报告项目名称：PUMA-BH3 28 肽基因工程菌的构建及其抗肿瘤活性讨论一、讨论背景和意义Bcl-2 家族的蛋白一直是肿瘤讨论领域的热点，其中一些蛋白如 Bcl-2、Bcl-xL 等则是一些常见肿瘤细胞的抗凋亡基因。PUMA（p53-upregulated modulator of apoptosis）是 Bcl-2 家族的一个成员，其结构上类似于 Bax/Bak，可以诱导凋亡。在正常细胞中，p53 可以直接上调 PUMA 的表达，起到抑制肿瘤的作用。但是某些原因导致 p53 功能失调，PUMA 表达降低，使得癌细胞对凋亡的敏感性降低，从而促进了癌细胞的生长。因此，建立一种能够刺激癌细胞凋亡的方法是非常重要的。近年来，越来越多的证据表明，人工合成的 p53 依赖型 PUMA-BH3 28 肽可以有效地诱导肿瘤细胞凋亡，而且可以进一步提高化疗药物的抗肿瘤活性。因此，本讨论将构建一种基因工程菌，用于表达 PUMA-BH3 28 肽，进一步验证其在肿瘤治疗中的应用前景。二、讨论内容和计划1.构建 pET-28a-PUMA-BH3 28 肽重组质粒利用纯化的 PUMA-BH3 28 肽基因序列序列设计引物，从 cDNA 模板中扩增出 PUMA-BH3 28 肽的基因片段，并将其连接到 pET-28a 载体上。随后，将构建好的重组质粒转化到大肠杆菌中，利用蛋白质质谱等技术对表达的 PUMA-BH3 28 肽进行鉴定。2.分析 PUMA-BH3 28 肽对肿瘤细胞凋亡的影响将表达 PUMA-BH3 28 肽的大肠杆菌培育物加入到肿瘤细胞培育基中，观察对肿瘤细胞的凋亡作用。同时，与化疗药物共同作用测定在低浓度下 PUMA-BH3 28 肽是否能够协同提高其抗肿瘤活性。3.评估 PUMA-BH3 28 肽在体内的抗肿瘤活性将表达 PUMA-BH3 28 肽的大肠杆菌制备成菌体悬液，注入小鼠体内，观察其对肿瘤生长的抑制作用，并探究影响其抗肿瘤效果的因素。精品文档---下载后可任意编辑三、预期结果及意义成功构建表达 PUMA-BH3 28 肽的基因工程菌，进一步探究其对肿瘤细胞的凋亡作用和其在体内的抗肿瘤效果，并评估其和化疗药物联合使用的抗肿瘤效应，对于癌症治疗有着重要的参考价值。本讨论有望为开发新的肿瘤治疗方案提供有用的思路和方法。
