精品文档---下载后可任意编辑shRNA 沉默 p115 基因表达抑制胃癌血管生成的体外讨论的开题报告背景：胃癌在全球范围内都是一种普遍的恶性肿瘤，而血管生成是其进展和转移过程中不可或缺的因素。p115 是一种与细胞膜的小 GTP 酶相关的蛋白，它可以调节细胞内信号通路，并且在许多肿瘤细胞中都高表达。之前的讨论表明，p115 对于肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等方面均有重要作用，然而其对于胃癌血管生成的影响尚不清楚。讨论目的：本讨论的目的是探究 p115 对胃癌血管生成的影响，并阐述其可能的分子机制。讨论方法：1. 环状 siRNA 合成：使用化学方法，将合成的核酸序列使用两个方向的引物进行扩增得到环状 siRNA。2. 细胞培育：通过将人类胃癌细胞株 MGC803 放入培育液中，将其培育至 80％的密度。3. shRNA 转染：将 p115 基因的 shRNA 进行转染，用药物物质如Hyperscreen AstroFect 转染试剂将其转染至培育的 MGC803 细胞中。4. 真核细胞的 RNA 提取和纯化：使用 Trizol 试剂将 MGC803 细胞取出，提取其 RNA，对 RNA 进行纯化处理。5. Real-time PCR: 使用 SYBR Green Master Mix 和 p115 基因的特异性引物对其进行实时 PCR 测定，对比测定未受转染和受到 shRNA转染的 MGC803 细胞组。6. 细胞增殖检测：通过 MTT 法和克隆形成试验，在转染过程中观察p115 的表达水平对 MGC803 细胞增殖中的影响。7. 蛋白质表达分析：使用免疫印记法观察 p115 基因的沉默对VEGF 和 CD31 的表达的影响。讨论预期结果：本讨论将会验证 p115 在胃癌 VEGF 诱导血管增生和血管通透性方面的功能，其沉默会显著抑制胃癌细胞的增殖并且通过抑制 VEGF 表达，精品文档---下载后可任意编辑减少新生血管形成。估计 p115 表达水平的表达与胃癌的生长、转移程度密切相关，为早期胃癌的治疗提供一定的理论依据和权威参考。
