精品文档---下载后可任意编辑shRNA 沉默 p115 基因表达抑制胃癌血管生成的体外讨论的开题报告背景:胃癌在全球范围内都是一种普遍的恶性肿瘤,而血管生成是其进展和转移过程中不可或缺的因素。p115 是一种与细胞膜的小 GTP 酶相关的蛋白,它可以调节细胞内信号通路,并且在许多肿瘤细胞中都高表达。之前的讨论表明,p115 对于肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等方面均有重要作用,然而其对于胃癌血管生成的影响尚不清楚。讨论目的:本讨论的目的是探究 p115 对胃癌血管生成的影响,并阐述其可能的分子机制。讨论方法:1. 环状 siRNA 合成:使用化学方法,将合成的核酸序列使用两个方向的引物进行扩增得到环状 siRNA。2. 细胞培育:通过将人类胃癌细胞株 MGC803 放入培育液中,将其培育至 80%的密度。3. shRNA 转染:将 p115 基因的 shRNA 进行转染,用药物物质如Hyperscreen AstroFect 转染试剂将其转染至培育的 MGC803 细胞中。4. 真核细胞的 RNA 提取和纯化:使用 Trizol 试剂将 MGC803 细胞取出,提取其 RNA,对 RNA 进行纯化处理。5. Real-time PCR: 使用 SYBR Green Master Mix 和 p115 基因的特异性引物对其进行实时 PCR 测定,对比测定未受转染和受到 shRNA转染的 MGC803 细胞组。6. 细胞增殖检测:通过 MTT 法和克隆形成试验,在转染过程中观察p115 的表达水平对 MGC803 细胞增殖中的影响。7. 蛋白质表达分析:使用免疫印记法观察 p115 基因的沉默对VEGF 和 CD31 的表达的影响。讨论预期结果:本讨论将会验证 p115 在胃癌 VEGF 诱导血管增生和血管通透性方面的功能,其沉默会显著抑制胃癌细胞的增殖并且通过抑制 VEGF 表达,精品文档---下载后可任意编辑减少新生血管形成。估计 p115 表达水平的表达与胃癌的生长、转移程度密切相关,为早期胃癌的治疗提供一定的理论依据和权威参考。