精品文档---下载后可任意编辑靶向 EV71 VP1 基因 siRNA 真核表达质粒的构建及筛选讨论的开题报告1. 讨论背景与目的手足口病是一种常见的儿童传染病，由多种肠道病毒引起，其中以肠道病毒 71 型（EV71）引起的手足口病病情最为严重，甚至可能导致严重的中枢神经系统疾病，如脑炎、脑膜炎等。因此，寻找有效的治疗手足口病的方法显得尤为重要。RNA 干扰（RNA interference，RNAi）技术是一种利用双链 RNA引起靶基因剪切降解的技术，能够选择性地抑制特定基因的表达，因此成为了一种治疗病毒感染和癌症等疾病的有前途的新方法。在本讨论中，我们将构建一种靶向 EV71 VP1 基因的 siRNA 真核表达质粒，并对其进行筛选和优选，以探究该技术在治疗手足口病方面的应用。2. 讨论内容与方法2.1 讨论内容（1）构建靶向 EV71 VP1 基因的 siRNA 真核表达质粒。（2）利用转染方法将 siRNA 真核表达质粒导入培育的人类肺上皮细胞中，检测其对 VP1 基因表达水平的影响。（3）筛选优选具有明显抑制 VP1 基因表达作用的 siRNA。（4）探究其在手足口病治疗方面的应用前景。2.2 讨论方法（1）猎取目标基因 VP1 的序列信息，设计并合成 siRNA 序列。（2）将 siRNA 序列克隆至真核表达质粒中，经 PCR 检测和测序鉴定。（3）采纳细胞培育技术，将 siRNA 真核表达质粒导入到肺上皮细胞中。（4）利用定量 PCR 和 Western blot 等技术检测 VP1 基因表达水平的变化，筛选出具有较好抑制效果的 siRNA。（5）通过动物实验等方式，探究其在手足口病治疗方面的应用前景。3. 预期结果与意义精品文档---下载后可任意编辑本讨论将构建出一种靶向 EV71 VP1 基因的 siRNA 真核表达质粒，并通过细胞实验和动物实验等方式进行验证，探究其在治疗手足口病方面的应用前景。结果有望为寻找新的手足口病治疗方法提供一定的理论和实验基础，对手足口病的防控和临床治疗具有一定的促进作用。
