实时荧光定量PCR 技术简介 5
1 PCR 技术从定性到定量的飞跃 1985 年Kary Mu llis 发明了聚合酶链式反应（Poly merase Chain Reaction, PCR），并因此于1993 年获得了诺贝尔化学奖
从1985 年至今的20 多年里，PCR技术得到了飞速的发展
传统的PCR 技术主要是对扩增产物进行定性判断，产物检测在反应结束后进行
一般通过电泳、溴化乙锭染色和紫外灯下检测等步骤判断产物是否存在，并通过与已知片断大小和含量的标准的对照，大致估测产物的大小及生成量
从20 世纪 90 年代初开始，许多实验室开始致力于相对准确的定量PCR 技术的研究
在这一过程中，应用较多的是半定量PCR（semi-qu antitativ e PCR）技术
半定量PCR 技术是在扩增靶序列的同时，选定一对照序列（通常是管家基因）进行扩增，在PCR 过程的指数增长期终止反应，再通过电泳比较目的基因和管家基因的产物相对量，从而得到起始模板在量的差异
半定量PCR 技术的准确性主要受 2 个环节的影响，一是必须确保 PCR 是在扩增的指数增长即线性阶段结束，因为只有在此阶段 PCR 的产物量才与起始模板量有对应关系；二是检测要通过常规的电泳方法进行，人为误差的因素将会影响这种定量的准确度
为了提高定量的准确性，人们开始设想在PCR 过程中加入荧光物质，这一物质会参与到第一轮 PCR 循环中，随着循环的进行和产物的增加，检测到的荧光物质也在发生变化，从而通过对荧光物质的检测进而全程监控 PCR 进程，最终可以计算出初始的模板量
1993 年，Higu chi 等[31]人将这一通过荧光物质定量PCR 模板量的设想付诸实现
随着荧光检测PCR 仪的商品化，实时荧光定量PCR进入了一个特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应和由计算机软件
