慢病毒介导的 RNAi 技术 一、概述 慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1（人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体
和一般的逆转录病毒载体不同，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力
该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达
并且它可以有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，因此具有广阔的应用前景
目前慢病毒被广泛地应用于 RNAi 的研究中
由于体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制
采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体, 然后转入细胞内转录siRNA 的策略，不但对基因表达抑制效果不逊色于体外合成 siRNA，而且稳定整合表达载体的细胞中，可以发挥长期阻断基因表达的作用
但上述两种方法，一是受到转染试剂转染效率的影响，在一些细胞内无法有效敲低（Knockdown）一些基因；二是传统方法得到稳定细胞株通常需要挑取单克隆，进行克隆化，这样费时费力
利用慢病毒介导的方法可以解决上述问题，这是因为慢病毒介导的 RNAi 具有下述优点： ● 慢病毒几乎可以感染所有种类的细胞，不存在某些细胞难以转染的问题
● 慢病毒可以在细胞基因组上稳定整合表达 siRNA 的元件，siRNA 表达效率比较均一，因此，无需挑取单克隆
● 慢病毒载体具有嘌罗霉素（Puromycin）抗性基因，Puromycin 可以在 2-3 天内杀死细胞，只有整合了病毒载体的细胞能够存活，这样缩短了得到稳定细胞株的时间
慢病毒表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾
当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会
