抗原修复技术及其在免疫组化中的应用 福尔马林固定时，组织中的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成了醛键，使得不少抗原决定簇被封闭。同时，由于甲醛的聚合作用，使蛋白质分子间相互交联形成大分子网络，也导致了抗原决定簇被掩盖，这就使得相当部分的抗原不能与抗体很好是进行反应。因此，抗原修复也是影响免疫组化染色结果的基本因素。抗原修复(Antigen retrieval ，AR)技术，建立在Fraenkel-conrat 等人[1]一系列生物化学研究，经1991 年shi 等人[2]发展。抗原修复是指石蜡、冰冻、火棉胶、塑料切片免疫组织化学（IHC）前用胰蛋白酶、尿素、表面活性剂、微波缓冲液和金属盐等，使被掩盖的抗原决定簇或变性的抗原重新暴露或抗原性得到一定程度的恢复过程。抗原修复能最大程度地恢复在制片等过程中损失的抗原性，使原来认为不能在石蜡切片上进行IHC 的许多抗体获得了良好的染色结果，成为一种有效的补救措施。本文的目的是概述 AR-HIC 的发展、应用和标准化。 一、 A R 技术 加热 A R 技术 微波加热方法. 在传统标准方法,经脱蜡、脱水和用3%H2O2 阻断内源性过氧(化)物酶，石蜡切片经蒸馏水冲洗，放置在塑料 Coplin 缸中。加入 AR 液，如蒸馏水、缓冲液、金属盐液、尿素等，盖上并置家用微波炉加热 5 或10 分钟（注意防止切片干躁）。有时在加热 5 分钟后，间隔 1 分钟，再加热 5 分钟（在第一个 5 分钟后检测液体高度）。加热后，从微波炉取出塑料 Coplin 缸，冷却 15 分钟。片子经蒸馏水冲洗二次后在PBS液中浸 5 分钟，才进行IHC 染色。为了保持一致的加热条件，必须设定靠近微波炉中心相同的位置及同一编号的Coplin 缸 ，按照不同的抗体设定不同的加热时间，尽可能的建立标准的加热条件。 微波（MW）加热过程如下：在专用盒内放入 200ml 柠檬酸缓冲液（PH6.0±0.1），并盖上带有小孔的盖子，微波加热至沸腾；将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架中，放入已沸腾缓冲液中，有作者提供做免疫组化时采用微波炉中等功率 800W[3]，微波炉选用解冻档的国产家用微波炉(根据目前的研究,建议用医用微波炉)，中档继续处理 10-20 分钟；取出微波塑料缸冷却至室温，从缓冲液中取出玻片，片子经蒸馏水冲洗二次，之后用 PBS（PH7.2-7.4）冲洗两次，每次 3 分钟。 尽管有少数作者[4]认为经高温后冷却这一步省略。在我们观点，15 分钟的冷却必须的几点理由：1、如这一步省略，对于有些抗体而言...
