细胞不均匀的问题 原因: 1.培养液量少,由于瓶体内液体有向边缘吸的特性,所以造成中间低洼,细胞容易聚集,建议多加液体 2.接种后不要摇晃,传统的思想认为摇一摇能使细胞均匀,但是事实上在摇晃的时候由于剪应力等多种因素的影响,细胞反而分布不均。 解决方案: 1) 接种到培养瓶的细胞,轻轻地让细胞悬液流遍整个瓶底; 2) 接种到培养皿或者培养板的细胞,用枪头对准中央加,让细胞悬液自行流遍整个孔,若有少量区域未能覆盖到细胞悬液,可用枪头轻轻牵引悬液,千万不要摇。细胞悬液铺满后,不宜立刻放入孵箱中,我一般静置>15min,这样接种的细胞很均匀。 3) 培养皿 划“十”字交叉轻轻混匀(力度不易太大,否则剪切力损伤细胞),重复一次。 轻轻放入孵箱即可。 (1)平底和圆底(U 型和 V 型)培养板的区别和选择: 贴壁细胞一般用平底培养板。悬浮型细胞的培养一般用 V 型。 U 型培养板亦多用于培养悬浮型细胞 。V 型培养板有时用做免疫学血凝集的实验。 (2)细胞培养常见问题与解答 问:我看到培养板有 4、6、12、24、48、96 孔几种规格 ,但不知道到底什么实验用哪种规格。 答:要根据你具体的实验要求,流式一般用 6 孔,MTT 一般用 96 孔,细胞爬片一般用 24 孔等,要具体根据你实验来定。 问:我想测吸光度用酶标仪,用多孔细胞培养板行吗?请问酶标板 多孔细胞培养板有什么区别? 答:用多孔细胞培养板测吸光度肯定可以拉,我们经常用它来做样品的蛋白定量和 MTT 检测。 区别:酶标板一般要比细胞培养板贵,细胞板主要做细胞培养,但也可以用来测蛋白浓度;酶标板包括包被板和反应板,一般不能用做细胞培养,它主要做免疫酶联反应后的蛋白检测,它需要更高的要求还需要特定的酶标工作液。常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量:不同孔板所加培养液的液面都不宜太深,一般在 2-3m m 范围,结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量。若加液量过多会影响气体(氧气)交换,而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。 (3)细胞培养板的密闭和污染问题 问:96,24 孔培养板或培养皿的盖子都很松,这样是方便了透气,但是细菌、霉菌等污染物会不会也随着溜进去呢? 答:1.盖子很松,属于半开放培养,这样的目的是透气(实际上是为了使培养皿外的 co2 能够与培养皿充分交换,维持培养基的 pH 值)。 2.凡事有利必有弊,这样当然增加了...