异 硫 氰 酸 胍 强 用 力 的 蛋 白 质 变 性 剂 , 能 迅 速 溶 解 蛋 白 质 , 导 致 细 胞 结 构 破 碎 , 核 蛋 白 由 于 其 二 级 结构 的 破 坏 消 失 而 迅 速 与 核 酸 分 离 。 胍 盐 是 破 坏 蛋 白 质 三 维 结 构 的 离 液 剂 , 在 通 常 使 用 的 蛋 白质 变 性 剂 中 作 用 最 强 的 是 异 硫 氰 酸 胍 , 它 们 可 以 使 多 数 蛋 白 质 转 换 成 一 随 机 的 卷 曲 状 态 。 含有 强 力 的 阴 离 子 和 阳 离 子 基 团 , 它 们 可 以 形 成 较 强 的 氢 键 。 在 还 原 剂 存 在 的 情 况 下 , 异 硫 氰酸 胍 可 以 断 裂 氢 键 , 而 去 垢 剂 , 如 SDS 存 在 的 情 况 下 , 可 以 破 坏 疏 水 作 用 。 盐 酸 胍 、 尿 素 盐 酸 胍 是 一 个 核 酸 酶 的 强 抑 制 剂 , 它 并 不 是 一 种 足 够 强 的 变 性 剂 , 可 以 允 许 完 整 的 RNA从 富 含 RNase 的 组 织 中 提 取 出 来 。 4-8M 可 断 裂 氢 键 , 有 两 种 可 能 机 制 : 1 变 性 蛋 白 和 盐 酸 胍 、 尿 素 优 先 结 合 , 形 成 变 性 蛋白 -变 性 剂 复 合 物 , 当 复 合 物 被除去 , 从 而 引起N-D 反应平衡向右移动, 随 着变 性 剂 浓度增加, 天然状 态 的 蛋 白 不 断 转 变 为复 合 物 , 最 终导 致 蛋 白 质 完 全变 性 ;2 盐 酸 胍 、 尿 素 对氨基酸 的 增溶 作 用 , 能 形 成 氢 键 , 当 浓度高时, 能 破 坏 水 的 氢 键 结 构 , 结 果盐 酸 胍 、 尿 素 就称为非极性 残基 的 较 好溶 剂 , 使 蛋 白 质 内部的 疏 水 残基 伸展和 溶 解 性 加强 , 盐 酸 胍 、 尿 素 引起的变 性 往往是 不 可 逆的 。 高浓度尿 素 使 蛋 白 质 变 性 并 抑 制 Rnase 活性 十二 烷基 肌氨酸 钠 使 蛋 白 质 解 体 变 性 巯基 试剂 1 防止蛋 白 质 或酶 等(如 辅酶 A)分 子 中 SH 基 团 氧化成 二 硫 键 , 2 在 某些酶 反应过程中维 持体系的 还 原 环境。 DTT...