核酸的分离与纯化 核酸在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的
核酸的分离主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子分开
在分离核酸时，应遵循两个原则：一是保证核酸一级结构的完整性，因为完整的一级结构是核酸结构和功能研究的最基本的要求；二是尽量排除其它分子的污染，保证核酸样品的纯度
核酸分离与纯化的过程一般都包括了材料的选择、核酸的释放、核酸与其它生物大分子的分离、核酸的纯化与鉴定、核酸的浓缩、保存等几个主要步骤
每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现
一、材料的选择 临床常见的标本血液、组织及体外培养的细胞等都可作为提取核酸的原料，具体实验材料的选择应根据实验的目的来确定
二、核酸的释放 （一）机械法 包括低渗裂解、超声裂解、微波裂解、冻融裂解和颗粒破碎等物理裂解方法
这些方法用机械力使细胞破碎，但机械力也可引起高分子量线性分子的断裂，因而不适用于染色体 DNA的分离纯化
（二）化学法 在一定的 pH 环境下，加入表面活性剂或强离子剂使细胞裂解，蛋白质和多糖沉淀， 核酸被从细胞内释放出来
向缓冲液中加入一些金属离子螯合剂抑制核酸酶的活性，保护核酸不被降解
（三）酶法 通过加入溶菌酶或蛋白酶（如蛋白酶K）使细胞破裂，核酸释放
蛋白酶还能降解与核酸结合的蛋白质，促进核酸的分离
溶菌酶能催化细菌细胞壁的蛋白多糖 N-乙酰葡糖胺和 N-乙酰胞壁酸残基间的β -1,4 键水解
蛋白酶K 能催化水解多种肽键，且在 65℃及有 EDTA、尿素和去垢剂如0
5%SDS 或1%Triton X-100 存在时仍保留有酶活性，对于高分子量核酸的提取有很大的优势
三、核酸的分离与纯化 （一）核酸分离纯化的基本方法 1
酚抽提法 细胞裂解后离心分离含核酸的水相，加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇混合液，混匀后离心分离
疏水性的蛋白质被分配至有机相
