植物组织培养母液的配制与保存 目的 熟练掌握植物组织培养中各种成分或成分组的母液(比需要量大若干倍)的配制方法。 实验仪器 电子天平(感量为0.0001g)、一般天平(感量为0.1g)、烧杯 100mL 50 mL 25mL)、量筒(1000 mL 100 mL 50 mL)、容量瓶 200 mL 100 mL 50 mL 25 mL)、细口瓶(500 mL 200 mL 100 mL 50 mL)、药勺、玻棒、电炉等。 实验试剂 按培养基配方准备 实验原理 一)培养基的组成 培养基是植物组织培养中的“血液”,血液的成分及其供应状况直接关系到培养物的生长与分化,因此了解培养基的成分、特点及其配制至关重要。自然状态下生长的绿色植物由于自身能进行光合作用,并且能合成植物生长发育所需的几乎所有有机成分,加上土壤中含有较全面的无机和有机营养成分,所以只需在适当的时候施加少量的无机和有机肥(复合成分),植物就可良好的生长。目前所使用的培养基有 10 余种之多,大部分都是在前人研究的基础上经过分析综合和改进而成的。例如,White 培养基是 Uspenski 和 Uspenskaia(1925)的藻类培养基演化的结果,被广泛用于根的培养;Cau theret 培养基是建立在 Knop 营养液(1865)基础上的。以后的培养基大部分是在 White 和 Cau theret 培养基的基础上改进而成。 就目前所使用的各种培养基而言,可将它们的成分划分为几大类,常用的有 MS、 B5 、和White 培养基等。 1.水 水是植物原生质体的组成成分,也是一切代谢过程的介质和溶媒。配制培养基母液时要用蒸馏水,以保持母液及培养基成分的精确性,防止储藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水,以防成分的变化引起不良效果。 2.无机营养成分: 大量元素,主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种 微量元素:培养基的微量元素主要包括铁(Fe)、锰(Mn)、铜(Cu )、锌(Zn)、氯(Cl)、硼(B)和钼(Mo)等。这些元素有的对生命活动的某个过程十分有用,有的对蛋白质或酶的生物活性十分重要,有的是参与某些生物过程的调节。 3. 有机营养成分(包括维生素,氨基酸及其它有机物质等) 维生素:硫氨素(维生素 B1)盐酸吡哆醇(维生素 B6)和烟酸 在部分培养基中还添加维生素 BX(氨酰苯甲酸)、维生素 C(抗坏血酸)、维生素 E(生育酚)、维生素 H(生物素)、维生素 B12(氰钴胺酸)、维生素 BC(叶酸)、维生素 B2(核黄素)、泛酸钙和氯化胆碱等维生...