第6章核酸检验基本技术VIP专享

第六章核酸检验基本技术第一节分子生物学基本知识一、DNA 和 RNADNA 是脱氧核糖核酸的英文缩写。DNA 以核苷酸排列顺序形式储存遗传信息。DNA 分子由 4 种核苷酸组成，由碱基互补维持 DNA 双螺旋结构。在动植物、细菌和真菌中都含有 DNA，但在病毒中不一定含 DNA。DNA 为长丝状分子相互纠缠，其溶液十分黏稠。它对紫外线有最强的吸收，通常用 260nm 波长测 DNA 溶液浓度，它在近中性环境中带负电荷，DNA 变性后 OD 值会升高。因 DNA 不溶于乙醇，常用二倍量乙醇沉淀 DNA。在变性温度时，它的黏性突然降低。淬火是为了保持 DNA 单恋状态。DNA 变性后溶液慢慢冷却，DNA 会自动回复双螺旋结构。RNA 是核糖核酸的英文缩写，在大多数生物类型中，RNA 起遗传信息传递作用并指导合成蛋白质，但在一部分病毒中，RNA 也是遗传信息的保存者。RNA 分子中除了含有核糖而不是脱氧核糖外，凡 DNA 中出现胸腺嘧啶的地方都代之以尿嘧啶。二、DNA 的复制和修复细胞分裂一次，染色体 DNA 就合成一次。DNA 分子拆开成两条链，每一条单链按照碱基配对的原则合成另一条新的单链，成为半保留复制。在合成 DNA 时限制性核酸内切酶不是合成 DNA 的必要条件。DNA 多聚酶只能结合在一长段 DNA 单链的一小段局部双链结构上，才能顺利开始 DNA 合成。在 DNA 合成中单核苷酸分子必须顺序以共价链连接在已形成核酸链 3'末端的羟基上。在合成大声错误时，DNA 多聚酶会切除错误核苷酸，在那个位置上重新加一个正确核苷酸。在人工合成 DNA 时，至加一种或两种三磷酸单核苷酸，那么和成就会停止在缺失的核苷酸位置上。在大肠菌 DNA 损伤修复时填补缺口最重要的酶是 DNA 聚合酶 I,而复制最主要的 DNA 聚合酶是 DNA 聚合酶 II。该酶的核心聚合酶中，具有 3'-5'外切酶活性。DNA 修复过程中尿嘧啶糖基酶系统不包括 SI 核酸酶。逆转录酶的 RNAaseH 活性是一般 DNA 聚合酶所不具备的。三、转录在生物体内，DNA 知道的 RNA 合成过程称为转录。它是按照储存在 DNA 尚的遗传信息合成。合成 RNA 时 DNA 双链也要解旋，解旋部位称启动子。大肠菌的 RNA 聚合酶有 5 个亚基，其。亚基有启动子作用。四、翻译再合成各种不同 RNA 中，tRNA 具有搬运氨基酸功能。构成核糖体骨架的是 rRNA，而 mRNA 直接决定蛋白质的结构。4 种核苷酸排列组成遗传信息，很撑蛋白质时转换成 20 种氨基酸的排列顺序，遗传信息...