病原菌的分离培养和纯化

普通植物病理学 实验十七、病原菌的分离培养和纯化 一、目的要求 (1)了解分离与纯化微生物的基本原理及方法。 (2)掌握倒平板的方法和组织分离、稀释分离、平板划线分离的基本操作技术。 (3)掌握在平板、斜面及液体培养基上培养病原菌及观察其培养性状的方法。 二、基本原理植物病原菌的分离培养，是植物病理实验室工作中的基本技能。为了获得某微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧气等条件要求不同，而供给它们适宜的生活条件，即让病原菌生活在适宜的培养基上，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而得到纯菌株。植物病原真菌的分离方法主要有组织分离法和稀释分离法两种。最常用的方法是组织分离法，而稀释分离法主要用于病组织上产生大量孢子的病原真菌的分离。病原细菌的分离方法以划线分离法为最常用，在有些情况下也采用稀释分离法。为了获得分离菌的纯培养，必须要进行分离菌的纯化，纯化的方法类似于分离工作中采用的稀释分离法或划线分离法。 三、材料、仪器与用具 1．材料(依当地情况进行选择，下列材料供参考 ) (1)稻 瘟 病叶 、病节 、病穗 颈 (py ricu laria ory cae)。 (2)玉 米 大斑 病叶 (ex serohilu m tu rcicu m)。 (3)玉 米 弯 孢菌叶 斑 病叶 (cu rv u laria lu nata)。 (4)玉 米 小 斑 病叶 (bipolaris may dis)。 (5)番 茄 灰 霉 病果 (botry tis cinefca)。 (6)黄瓜菌核病果(sclerotinia sclerotioru m)。 (7)黄瓜细菌性角斑病叶(pseu domonas sy ringaepv ．1achry mans)。 (8)水稻白叶枯病叶(x anthomonas campestms pv .ory eu e)。 (9)大豆细菌性斑点病叶(pseu domonas sy ringaepv ．gly cinea)。 (10)白菜软腐病叶(eru dnia carotov ora su bsp．carotov ora)。 2．培养基 pda 培养基；肉膏蛋白胨培养基；加寄主组织煎汁的培养基等。 3．仪器与用品 超镜工作台、培养箱、培养皿、吸管、吸水纸、三角玻璃棒、剪刀、解剖刀、镊子、接种铲(针)、接种环(铒)、70％酒精、0．1％升汞、酒精灯、火柴、记号笔、橡皮筋套、可调式电炉、铝锅等。0．1％升汞溶液配制：升汞 1e 浓盐酸 2．5ml 蒸馏水 1000ml。先将升汞溶于盐酸中，待充分溶解后，再加水稀释。升汞是剧毒药物，在操作时应特别小心。 四、实验操作 (一)病原真菌的分离 1．组织分离法 按照以下步骤进行： (1...