方案一 实验方法：一步法共价结合 实验步骤： 1、配制50mM 的MES 反应缓冲溶液，pH 值为6.0； 2、将蛋白质溶解于反应缓冲溶液中，其浓度为10mg/L； 3、用反应缓冲溶液稀释胶乳微球，使其浓度为1%（W/V）； 4、将上述蛋白质溶液与胶乳微球混合，混合后在温室培育20 分钟； 5、用去离子水配制EDAC 溶液，浓度为10mg/mL（52μmol/mL）； 6、取计算量的EDAC 溶液加到蛋白质与胶乳微球混合液中； 7、用0.1M 氢氧化钠（NaOH）溶液调整该反应混合液的pH 值至6.5±0.2，在摇床温室培育2 小时； 8、将未结合的蛋白质除去，贮藏于缓冲溶液中。 方案二 实验方法：简单二步法共价结合 实验步骤： 1、配制50mM 的MES 反应缓冲溶液，pH 值为6.0； 2、将蛋白质溶解于反应缓冲溶液中，其浓度为10mg/L； 3、用反应缓冲溶液稀释胶乳微球，使其浓度为1%（W/V）； 4、1mL 胶乳微球悬浮液，加入20mgEDAC，在室温培育40 分钟，在20 分钟后第二次加入20mg/mL； 5、用相等体积的该缓冲溶液来洗涤胶乳微球，离心，用1 倍体积的缓冲溶液重复处理； 6、将蛋白质溶解于50-100mM 的MES 缓冲溶液中，蛋白质浓度为1mg/mL； 7、再将胶乳微球悬浮于去离子水或结合的缓冲溶液中，迅速加入溶解的蛋白质，37℃搅拌反应3 小时； 8、按1mL 反应混合液加入2.5μL 乙醇胺混合，搅拌反应10 分钟； 9、除去未结合的蛋白质，贮藏与贮存的缓冲溶液中 方案三 实验方法：生成NHS-酯的中间体二步法共价结合 实验步骤： 1、每ml 反应混合物加入下列各物： a． 去离子水是最后容积为1.0mL； b．0.1mL 的10x的贮备缓冲溶液，其pH 值为6.0-6.5（一般可用0.5M MES 缓冲溶液）；胶乳微球最终浓度为1%（W/V）； c． 0.23mL 的50mg/ml 的NHS 在去离子水中的溶液； d．19.2mg/mL（100mM）的EDAC 在去离子水中的溶液 2、在室温将此混合物反应15-30 分钟，不断搅拌； 3、用MES 缓冲液或纯化水洗涤胶乳微球悬浮物，除去未反应的NHS 和EDAC； 4、重新将胶乳微球在去离子水中悬浮，使其浓度为1%（w/v）； 5、将结合的蛋白质溶于50-100mM 的MES 缓冲溶液中，浓度为1mg/mL； 6、立即加入蛋白质溶液（胶乳微球、蛋白质和缓冲溶液的浓度分别为0.5%（w/v）、0.5mg/mL、25-50mM）； 7、将混合物反应至少2 小时，轻轻搅拌； 8、按1mL 反应混合液加入2.5μL 乙醇胺混合，搅拌反应10 分钟； 9、除去未结合的蛋白质和乙醇胺，贮于适宜的贮...
