附件7 脑膜炎奈瑟菌实验室检测操作规范 一、脑膜炎奈瑟菌鉴定程序和标准 1、 脑膜炎奈瑟菌细菌鉴定程序 脑膜炎奈瑟菌的鉴定通常是通过在CAP 和BAP 上生长物通过革兰染色镜检和生化反应检测以确定是否为脑膜炎奈瑟菌，在此基础上再通过脑膜炎奈瑟菌分群诊断血清进行血清分群。 图x x 脑膜炎奈瑟菌鉴定程序 2、 脑膜炎奈瑟菌感染确诊实验室检测 疑似流脑病例具有以下实验室检测结果之一，即可确诊： 1. 培养：自脑脊液或血液标本中分离到脑膜炎奈瑟菌。 2. 乳胶凝集检测：采用乳胶凝集检测试剂盒，脑脊液标本乳胶凝集检测结果BAP,CAP 生长物 革兰氏染色为阴性双球菌 氧化酶反应 阳性，进行生化鉴定 阴性，非脑膜炎奈瑟生化鉴定（糖氧化） Glu Mal Lac Su c ＋ ＋ － － 阳性，为脑膜炎奈瑟菌 进行血清分群 阴性，非脑膜炎奈瑟菌 A、B、C、H、I、K、L、W135、X、Y、Z、Z´(29E)不 同 血清群 阳性，目前Bio-Rad 乳胶凝集检测试剂盒能检测A 群、B 群、C 群和 W135/Y 群脑膜炎奈瑟菌感染。 3. PCR 检测：脑脊液标本或血液标本 PCR 扩增特异性脑膜炎奈瑟菌 DNA片段阳性。 通过 ctrA 基因扩增，鉴定脑膜炎奈瑟菌，通过扩增 orf-2、siaD(B)、siaD(C)、siaD(Y)、siaD（W135）等基因片段鉴别不同的血清群，或通过 Real-time PCR 检测出特异性基因片段阳性。 4. 血清 IgG 抗体滴度 4 倍增高：恢复期血清抗体滴度较急性期 4 倍增高。 二、脑膜炎奈瑟菌标本接种培养 （一）脑脊液标本 1．脑脊液标本预处理 脑脊液标本送到实验室后，应立即离心，2000rpm，20min，用巴斯德吸管吸取上清，进行乳胶凝集实验检测抗原。离心后的沉淀进行剧烈振荡或充分混合。取 1 滴沉淀准备革兰染色，1 滴划线接种原始培养基。（注意:如果获得的脑脊液不足 1mL 则不进行离心，直接用其进行革兰染色和涂板培养）。 2. 脑脊液标本初代培养 脑膜炎奈瑟菌的初代接种培养基为巧克力琼脂平板。将离心后的脑脊液标本沉淀滴加至巧克力琼脂平板，取菌环划线接种。置5%的 CO2 孵箱或燃有蜡烛的烛缸中培养。也可将一些沉淀接种备用肉汤培养基（如脑心浸液肉汤培养基），进行孵育培养。如果用 T-I 培养基进行运输，在孵育 24h 后，用无菌的针或注射器转移 100 µl T-I 培养基的液体部分到 BAP 及 CAP上，并划线分离。 3. 脑脊液标本革兰染色（Hucker 改进方法） 脑脊液标本离心沉淀物革兰染色或采...
