基因工程复习总结

思考题第二章分子克隆工具酶1 简述基因工程讨论用的工具酶的类型和作用特点。2.说明限制性内切核酸酶命名原则(举例）。3。限制内切核酸酶的星活性是指什么?在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特别性称星星活性。星星活性是限制性内切酶的一般性质,任何一种限制酶在极端非标准条件下都能切割非典型位点.引起星星活性的因素:甘油浓度高（〉5%），酶过量(〉100U/ml）,离子强度低(<25 mmol/L）,pH 值过高（〉8.0）,或是加了有机溶剂如 DMSO(二甲基亚砜）、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺，或是用其它 2 价阳离子如 Mn2+、Cu2+、Co2+ 或 Zn2+代替了 Mg2+.4.T4 DNA ligase 和 E。coli ligase 有什么异同?5。连接酶的反应温度如何选择,为什么？连接酶最适的反应温度应是 37℃,但在这一温度下粘性末端的氢键结合不稳定,因此连接反应常采纳的最佳温度一般在 4—16℃间,通常多选用 12—16℃ 30 分钟到 16 小时.6.什么是 Klenow 酶？有什么作用?Klenow DNA 聚合酶是从全酶中除去 5′―3′外切活性的肽段后的大片段肽段，而聚合活性和 3′―5′外切活性不受影响。也称为 Klenow 片段(Klenowfrgment），或 E。coli DNA 聚合酶Ⅰ大片段（E。coli DNA polymeraseⅠlarge fragment).它也可以通过基因工程得到,分子量为 76 kDa.由于没有 5′―3′外切活性,使用范围进一步扩大。① 补平 3′凹端,假如使用带标记的 dNTP，则可对 DNA 进行末端标记.② 抹平 DNA3′凸端在 3′―5′外切活性③ 通过置换反应对 DNA 进行末端标记④ 在 cDNA 克隆中合成第二链⑤ 随机引物标记⑥ 在体外诱变中，用于从单链模板合成双链 DNA···7.如何利用工具酶来讨论某一个基因内含子的存在？···8。哪些工具酶可以用于探针标记？T4 DNA 聚合酶的替代合成法标记 DNA 探针.反转录酶还可利用单链 DNA 或 RNA 作模板合成分子探针。第三章分子克隆载体1。基因工程载体应具备哪些特点？能在宿主细胞中独立复制;有一定的选择标记,易于识别和筛选；有合适的限制酶位点，可插入一段较大的外源 DNA，而不影响其本身的复制; 最好有较高的拷贝数，便于载体制备.2。作为一个最基本的载体，它必须具备哪些功能元件？能独立复制的单链或双链 DNA；选择标记基因；合适的限制酶位点.···3。请简要描述 λ 噬菌体溶原状态和裂解循环的基因调控模式及其在构建载体中的作用.4。丝状噬菌...