病原菌的分离培育方法一、基本原理 植物病原菌的分离培育，是植物病理实验室工作中的基本技能。为了获得某微生物的纯培育，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧气等条件要求不同，而供给它们适宜的生活条件，即让病原菌生活在适宜的培育基上，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长,而抑制其他菌生长的环境,从而得到纯菌株.植物病原真菌的分离方法主要有组织分离法和稀释分离法两种。最常用的方法是组织分离法，而稀释分离法主要用于病组织上产生大量孢子的病原真菌的分离。为了获得分离菌的纯培育，必须要进行分离菌的纯化,纯化的方法类似于分离工作中采纳的稀释分离法或划线分离法。二． 病原真菌的分离培育（花生褐斑病为例）1. 分离的准备工作(1)分离材料准备:花生褐斑病叶片：病斑圆形或近圆形暗褐色、黑褐色,淡黄色晕圈。背面有许多黑色小点，呈同心轮纹状排列.（2）培育基的准备： PDA 培育基，加热熔化，紫外灭菌后倒板； （3)分离工作仪器与用品:超镜工作台、培育箱、无菌培育皿、剪刀、解剖刀、镊子、接种铲(针）、70％酒精、0．1％升汞、酒精灯、火机、记号笔、橡皮筋套、可调式电炉等。（升汞是剧毒药物，在操作时应特别小心）。2. 组织分离法 （1） 工作前用肥皂洗手，无菌操作前还要用 70％酒精擦拭双手;在使用无菌操作间时，呼吸要轻,不要说话。（2） 酒精灯放入中间合适位置，点燃后不要在移动，保证火焰周围无菌环境；（3） 取花生褐斑病的症状典型病叶(或其他分离材料），选择典型的单个病斑，用剪刀或解剖刀从病斑边缘（病健交界处）切取小块病组织数块。（选择新患病的组织作为分离的材料，可以减少腐生菌混入的机会。腐生菌一般在发病很久而已经枯死或腐败的部分滋生，因此，一般斑点病害应在临近健全组织的部分分离.）（4） 表面消毒：用菌培育皿一次准备流程（75%酒精-0.1％升汞—无菌水—无菌水—无菌水），将病组织放人 70%酒精中浸 3-5s 后，按无菌操作法将病组织移人 0．1%升汞液中分别表面消毒 1 min 左右（如植物组织柔嫩,则表面消毒时间宜短；反之则可长些）,然后放入灭菌水中连续漂洗三次,除去残留的消毒剂。（5） 用无菌操作法将病组织移至平板培育基上，每皿内放 3—5 块。（在将病组织小块移放到平板表面之前，应将其在无菌吸水纸上吸去多余的水，以大大减少病组织附近出现细菌污染）。（6） 将培育皿倒置放人 25 ℃左右恒温箱内培育。一般 3—4d 后观察待分离菌生长结果；若病组...
