天花粉蛋白的融合表达与抗肿瘤效果的探讨摘要天花粉蛋白（Trichosanthin, TCS）是从中药植物栝楼块根中提取的一种 I 型核糖体失活蛋白，具有抗 HIV 感染、抗肿瘤等多种生物学活性。天花粉蛋白对黑色素瘤细胞、绒毛膜癌细胞等具有一定毒性，但由于缺乏对成纤维细胞、肝癌细胞等多种肿瘤细胞的敏感性，限制了在抗肿瘤方面的应用。细胞穿膜肽（Cell penetrating peptides, CPPs）是一类富含碱性氨基酸的短肽，具有介导蛋白质等生物活性分子高效进入细胞的能力。本研究就一种人源性穿膜肽 HBP 与重组天花粉蛋白融合表达，以此介导 TCS 高效进入肿瘤细胞内发挥其药理效应等进行探索。首先将 TCS 与 HBP 在原核表达系统中融合表达，经镍柱亲和层析进行样品纯化，纯化的样品经 MTT、激光共聚焦显微镜观察、流式细胞术等实验方法进行分析，考察其穿膜效果及体外诱导细胞凋亡能力、凋亡途径的研究。结果显示，细化一下，表明融合蛋白 TCS-HBP 相对于TCS 而言具有更为显著的体外抑制 Hela、B16、MCF-7 肿瘤细胞生长能力，且具有更广的细胞谱。Western Blot 实验结果 cleaved-caspase-3 表达水平存在显著上调，而 Bcl-2 表达水平存在显著下调，与细胞凋亡线粒体途径中各个效应物理论表达水平的调整趋势完全吻合，推测 TCS-HBP 可能通过线粒体途径诱导 Hela 细胞凋亡。本研究以穿膜肽与抗肿瘤蛋白药物融合表达的穿膜策略为导向，选择人源性穿膜肽与抗肿瘤药物天花粉蛋白融合表达，通过对其穿膜效果的考察及体外诱导细胞凋亡能力、凋亡途径的研究，为抗肿瘤药物 TCS 运输及活性提高提供了一种新的策略。 关键词：天花粉蛋白，穿膜肽，凋亡，药物运输质粒构建鉴定，表达蛋白分子量等信息 IAbstractTrichosanthin (Trichosanthin, TCS) is a type I ribosome extracted from Chinese medicinal plants of Trichosanthes in root tuber of inactivating protein with multiple anti HIV infection and anti-tumor biological activity. TCS has certain effect on melanoma cells, choriocarcinoma cells, but due to the lack of sensitivity of fiber cells, hepatoma cells and other tumor cells, limiting antineoplastic applications. Cell penetrating peptides (CPPs) is a class of short peptide rich in basic amino acids, which has...
