细胞培养标准流程VIP专享

细胞间基本规定每次操作结束后开启超净台紫外（30 min）和房间大紫外（30 min）。显微镜开启使用后将光调暗，最后一个操作者将显微镜关闭。超净台用完收拾洁净，移液器、盒子等摆放整齐。带走空盒子、细胞圆盘以及封口膜等任何因你而产生的垃圾。细胞培育盘至少需备注：所属者，细胞系名称细胞间冰箱内物品至少需备注：所属者，物品名称.基培需写上开启时间.细胞培育标准流程1、 细胞换液、传代（以圆盘培育为例）Note：所有用于培育细胞的液体均需提取 20—30 分钟从冰箱取出恢复到室温或置于 37℃的水浴箱内。所有物品(包括双手）进入安全柜之前要酒精消毒。步骤：1。观察：高倍镜下观察细胞状态、密度以及是否染菌 2.弃旧:细胞生长融合达 90％时，吸出培育基 3。漂洗:PBS（2mL） 漂洗 1-2 次 4。消化：加入 1ml 0.25%胰蛋白酶，轻轻晃动圆盘让所有细胞接触到胰酶，后吸去胰酶计时 CO2 放置 40s-1min,，轻轻拍打圆盘侧壁促使细胞脱壁。 5.终止：吸弃胰酶后加入 2ml 含 10％FBS 的完全培育基终止消化. 6。吹悬:轻轻吹打混匀，（倒置显微镜下观察细胞完全脱壁，呈卵圆形），吹打成单细胞悬液后按 1：2 或 1：3 比例传代接种于新培育皿。再加入 10ml 全培。（大盘 10ml 全培,小盘 6ml 全培）（细胞生长快留 30%，慢 40%-50％；其余细胞可提取蛋白或RNA) 7.培育:每天或每两天更换一次培育基，直至细胞生长至融合时再次进行传代，每日在倒置显微镜下观察细胞形态及生长情况。PS：六孔板一般加培育基 2300μL/孔。2、 细胞转染 TurboFect 转染试剂转染(用于质粒的转染,说明书附后）细胞接板24 h 后转染。转染时细胞密度需达到70-90%.以6 孔板为例，转染前细胞先换液，加4ml全培。取1。5 ml 离心管,加入400 μL 无血清无双抗DMEM 培育液,加入质粒2 μg，混匀后静置5 min,再转染试剂4 μL,混匀（转染试剂是质粒的2倍）,室温静置15－20 min。(转染试剂需加在培育液中部,切忌勿贴壁；静置时间不可超过20 min）无血清无双抗DMEM量＝全培体积的10％。如6孔板加4mL培育液培育，即转染体系为400ul无血清无双抗DMEM。缓慢均匀加到培育液后，轻轻晃动圆盘，使其均匀分布.转染后6h后细胞换液，排除试剂的毒性影响。24～48 h 后收集细胞用于后续实验.Note：假如用这种方法转染效率一直不佳，可以在接种细胞前，把转染试剂配好，把转染试剂加到培育盘上，再把细胞接种上。该方法不适用所有细胞,这种方法会...