细菌染色技术总结

细菌染色技术(2024—11—22 22:29：46) 目的要求初步掌握细菌涂片制作,单染色法及革兰染色法等染色技术。实验内容 1．细菌染色一般程序 涂片 干燥 固定 初染 （媒染） 脱色 复染 （1) 涂片 临床标本或液体培育物可直接涂抹于洁净的载玻片上,固体培育的细菌先在玻璃片上滴一滴生理盐水，然后取菌少许在盐水中磨匀，呈轻度混浊。涂好的菌膜大小一般以 1cm2 左右为宜。（2）干燥 涂片最好在室温下自然干燥，或将标本面对上，置于酒精灯火焰高处慢慢烘干，切不可在火焰上烧干。（3）固定 细菌的固定常用火焰加热法，即将上述已干的涂片在火焰中迅速通过 3～5 次，温度以手能摸时热而不烫为度。目的在于杀死细菌，凝固细胞质,改变细菌对染料的通透性。（4） 初染 不同的染色方法,所用染液也不同。染液以覆盖菌膜为度。 （5) 媒染 通过媒染可增加染料和被染物质的亲和力。媒染剂还可用于固定之后,亦可含在固定液或染液中。 （6） 脱色 此步骤主要目的是观察细菌与染料间结合的稳定程度,作为鉴别染色之用。 (7） 复染 细菌初染色被脱色后常以复染液复染,便于观察。复染液的颜色与初染液有明显不同。 2．常用染料原液配制 一般制备 100ml 纯酒精饱和溶液所需染料量：美兰 2g～5g；结晶紫 7g～14g；碱性复红 3g～7g。 3．常用的染色方法 (1） 单染色法 即用一种染料染色的方法。常用吕氏美兰或稀释石炭酸复红染液。 1) 染液 ① 吕氏美兰液 美兰酒精饱和液 30ml+0。01％KOH 溶液 70ml 即成。 ② 稀释石炭酸复红液 碱性复红酒精饱和液 10ml+5％石炭酸溶液 90ml，然后用蒸馏水作 10 倍稀释即成。 2） 菌种 大肠埃希菌普通斜面培育物。 3) 染色方法 于已做好的涂片上滴加吕氏美兰或稀释石炭酸复红染液，染色 1min，以水冲洗至无颜色流下为止，自然干燥或以远火烘干后镜检。 4） 结果 以美兰染色者菌体呈现兰色；以稀释石炭酸复红染色的菌体呈现红色。 （2） 革兰染色法 1） 原理 细菌被结晶紫着色后，再经媒染剂处理，染成深紫色或紫黑色。如被酒精脱去颜色,经复红复染成红色，称为革兰阴性菌；如不被酒精脱色,则仍为紫黑色，称为革兰阳性菌。 革兰染色的原理尚未完全明了，主要有三种学说：① 等电点学说 革兰阳性菌的等电点低（pH2~3),革兰阴性菌等电点较高（pH4~5)，一般染色液 pH值为 7。0 左右，故电离后阳性菌所带阴电荷比阴性菌多，因此,摄取带阳电荷的染料（如结晶紫)多...