基因工程复习归纳第一章 绪论1.基因工程的定义：是指根据人们的愿望，经过严密的设计，将一种或多种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体/宿主），使之根据人们的意愿稳定遗传、并表达出新的性状的技术。2.基因工程概念的进展：遗传工程→DNA 重组技术→分子/基因克隆（Molecular/Gene→基因工程→基因操作。应用领域以“基因工程”、“DNA 重组”为主基因工程基因工程的历史性事件1973：Boyer 和 Cohen 建立 DNA 重组技术1978：Genetech 公司在大肠杆菌中表达出胰岛素1982：世界上第一个基因工程药物重组人胰岛素上市1988：PCR 技术诞生1989：我国第一个基因工程药物 rhIFNα1b 上市2024: 世界上第一个基因治疗药物重组腺病毒-p53 上市3.基因工程的三大关键元件基因（供体）：外源基因、目的基因载体：能将外源基因带入受体细胞，并能稳定遗传的 DNA 分子（克隆载体、表达载体）。宿主（受体）：，能摄取外源 DNA、并能使其稳定维持的细胞（组织、器官或个体）。4.基因工程的基本步骤（切、接、转、增、检（大肠杆菌是中心角色）（1）目的基因的猎取：从复杂的生物基因组中，经过酶切消化或 PCR 扩增等步骤，分离出带有目的基因的 DNA 片断。（2）重组体的制备：将目的基因的 DNA 片断插入到能自我复制并带有选择性标记（抗菌素抗性）的载体分子上。（3）重组体的转化：将重组体（载体）转入适当的受体细胞中。（4）克隆鉴定：选择转化成功的细胞克隆（含有目的基因）。（5）目的基因表达：使导入寄主细胞的目的基因表达出我们所需要的基因产物。第二章 DNA 重组克隆的单元操作一、用于核酸操作的工具酶1. 限制性核酸切酶(主要存在于原核细菌中，帮助细菌限制外来 DNA 的入侵)。限制性核酸切酶的功能与类型主要特征I 型II 型III 型功能限切/修饰限切限切/修饰蛋白结构异源三聚体单体异源二聚体辅助因子ATP Mg2+ SAMMg2+ATP Mg2+ SAM识别序列TGAN8TGCTAACN6GTGC旋转对称序列GAGCCCAGCAG切割位点距识别序列 1kb 处识别序列距识别序列下游24-26bp 处其中 II 型限制性核酸切酶：切割位点专一，适于 DNA 重组，是 DNA 重组中最常用工具酶。特点：1.识别、并切割双链 DNA 分子中特异序列的 DNA 切酶。2.识别序列为 4-6 碱基对的回文对称结构（旋转对称结构）。3.单体蛋白、仅有限制性切酶活性，无甲基化酶活性。4.切割产物末端：5’突出末端、3’突出末端、平...
