石河子大学分子生物学实验结课论文绿色荧光蛋白(GFP)原核表达分析学生学号专业年级、班级指 导 教 师所在学院中国··石河子2024 年 1 月绿色荧光蛋白(GFP)原核表达分析摘要：本实验主要探讨目的蛋白（GFP）在大肠杆菌中的表达的情况以与鉴定目的蛋白形成的是包涵体还是可溶性蛋白。本实验先对菌液进行培育、活化、然后采纳 IPTG 分别对其不同时间点的诱导，用 SDS-PAGE 来确定目的蛋白的可溶性与其分子量，掌握 GFP 诱导不同时间的表达情况的检测方法。关键词：绿色荧光蛋白；SDS-PAGE；原核表达1 前言1.1 实验目的掌握聚合酶链式反应(PCR)的原理和操作方法；了解重组载体的构建方法；锻炼学生查阅文献资料、设计与优化实验的能力；加强学生对化学生物学中常用讨论方法的认知。1.2 实验背景 绿色荧光蛋白（green fluorescent protein GFP) 是源于多管水母属等海洋无脊椎动物的发光蛋白，其在蓝光或紫外光下可发出明亮的绿色荧光，可以作为报告基因检测蛋白的特异性表达或进行细胞定位讨论。与以往 lacZ、CAT 等报告基因相比，有很多无可比拟的优越性: GFP 不具有种属依赖性，在多种原核和真核生物细胞中都表达；荧光强度高，稳定性高；不需要反应底物与其他辅助因子，受蓝光激发产生绿色荧光,尤其适用于体的即时检测；另外 GFP 分子量小，易于融合，适用于多种转化方式，对受体无毒害,安全可靠；并且通过替换一些特别氨基酸，可以使之产生不同颜色的光，从而适应不同的讨论需要。正是由于 GFP 检测具有高灵敏度，操作简单，无需使用同位素等优点，近年来广泛用于基因的表达与调控、蛋白质的定位、转移以与相互作用、信号传递、转染与转化，以与细胞的分离与纯化等讨论领域。绿色荧光蛋白还在监测目的基因表达、讨论细胞物质代与追踪细胞系的分化等方面有着广泛应用。采纳 GFP 作为标记基因，可直接收集转化细胞供实验，缩短了筛选时间、减少对细胞活性的影响并可作为活体标记，为讨论发育的基因调控和分子机制提供了一种简洁有效的手段。同时也正因为其荧光反应不是酶反应，所以当细胞本身还存在一些可以受蓝光激发和产生绿色荧光的物质，或者 GFP 表达频率不高的情况下，GFP 的检测可能会产生一些假相，不易对荧光进行定量的测定。我们利用基因工程手段在大肠杆菌中高效的表达了 GFP，制备出 GFP 抗体，利用抗原与抗体之间的特异性，在体外对 GFP 进行检测，可在一定程度上弥补上述 GFP检测中可能出现的...
