食品生物技术汇总

基因工程1. 基因工程的 DNA 聚合酶有几类主要有哪些活性（1）依赖于 DNA 的 DNA 聚合酶：大肠杆菌 DNA 聚合酶 1（全酶）；大肠杆菌 DNA 聚合酶I 大片段（Klenow 片段）、耐热的 DNA 聚合酶（TaqDNA 聚合酶）等。大肠杆菌 DNA 聚合酶 1（全酶）具有三种活性：① 5'—3'DNA 聚合酶活性，以单链 DNA 为模板，以带 3'自由羟基的 DNA 片段为引物；② 5'—3'外切核酸酶活性，从 5'端既降解双链DNA,也降解 RNA-DNA 杂交体中的 RNA 链（RNA 酶 H 活性）；③ 3'—5'外切核酸酶活性，底物为带 3'自由羟基的双链 DNA 或单链 DNA。主要用于：①以切刻平移法标记 DNA；②对DNA 分子的 3'突出尾进行末端标记。大肠杆菌 DNA 聚合酶 I 大片段（Klenow 片段）5'—3'DNA 聚合酶活性，以单链 DNA 为模板,以带 3'自由羟基的 DNA 片段为引物。3'—5'外切核酸酶活性，底物为带 3'自由羟基的双链DNA 或单链 DNA。TaqDNA 聚合酶具有一种活性：5'—3'DNA 聚合酶活性，以单链 DNA 为模板，以带 3'自由羟基的 DNA 片段为引物。主要用于：①对 DNA 进行测序；②通过聚合酶链式反应对 DNA 分子的特定序列进行体外扩增。（2）依赖于 RNA 的 DNA 聚合酶（即逆转录酶）：优先以 RNA 为模板，也可以 DNA 为模板。逆转录酶能以 RNA 为模板催化合成双链 DNA。逆转录酶（依赖于 RNA 的 DNA 聚合酶）具有两种活性：① 5'—3'DNA 聚合酶活性，以 RNA或者 DNA 为模板，以带 3'自由羟基的 RNA 或 DNA 片段为引物;②RNA 酶 H 活性，即 5'—3'外切核糖核酸酶活性，特异地降解 RNA-DNA 杂交体中的 RNA。逆转录酶无 3'—5'外切核酸酶活性，即无校对功能，其催化的聚合反应容易出错。（3）末端脱氧核苷酸转移酶（简称末端转移酶）：不以 DNA 或 RNA 为模板，只是将核苷酸加到已有 DNA 分子的末端。末端脱氧核苷酸转移酶（末端转移酶）具有一种活性：即末端转移酶活性，在二价阳离子存在下，其催化 dNTP 加于 DNA 分子的 3'-羟基端。主要用于：①给载体 DNA 或 cDNA 加上互补的同聚尾；②以 32P 标记的一种 dNTP 或一种 rNTP 来标记 DNA 片段的 3'端。2. 基因工程的大肠杆菌载体有哪些，各有什么特点3. 琼脂糖凝胶电泳的原理有什么特点基本原理：在生理条件下，核酸分子之间糖－磷酸骨架中的磷酸基团呈离子化状态。当核酸分子被放置在电场中时，它们会向正电极...