抗 HIV1 Tat 蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定【摘要】 目的: 制备抗 HIV 1 Tat蛋白的单克隆抗体, 并对其进行初步鉴定。方法: 通过动物免疫、 细胞融合、 克隆化制备抗 Tat 蛋白的 mAb, 并用 ELISA 法对所得 mAb 的特异性、 抗原识别表位及相对亲和力等做了初步鉴定。结果: 获得了 3株抗 Tat 蛋白的 mAb, 这 3 株 mAb 均能特异识别 Tat 蛋白。结论: 获得了 3 株杂交瘤细胞系, 均可以稳定分泌抗 HIV 1 Tat蛋白的mAb, 有望为 HIV 早期检测及 HIV 抗病毒治疗提供有用工具。【关键词】 HIV 1 Tat 单克隆抗体 自 1981 年发现艾滋病以来, 艾滋病在全球迅速扩散, 人免疫缺陷病毒是引起AIDS 的病原体。HIV 有许多结构蛋白以及调节蛋白, 其中 Tat 蛋白是很重要的调控蛋白之一, 是 HIV 基因复制和表达调控所必需的［1］。Tat 蛋白由 2 个外显子编码, 其中第 1 个外显子编码 l～72 位氨基酸残基, 第 2 个外显子编码 73～101 位氨基酸残基。由第 1 个外显子编码的 72 个残基的肽段具有完全的体外反式激活活性。Tat 是 HIV 最早产生的病毒蛋白之一, 其入核后通过结合 HIV 长末端重复序列和反式激活效应元件, 进一步促进病毒 RNA 的产生, 是病毒复制的重要激活分子［2］。本讨论中通过免疫 BALB/c 小鼠获得 Tat 蛋白的单克隆抗体, 并用 ELISA 等方法检测 mAb 的性质, 为HIV 早期检测以及抗病毒治疗提供了新的思路。 1 材料和方法 材料 纯化的 Tat 蛋白由美国丹佛大学惠赠。BALB/c 小鼠购买第四军医大学实验动物中心。小鼠骨髓瘤细胞株 Sp2/0 为本试验室保存。RPMI1640 干粉培育基购自 Gibco 公司。小牛血清购自四季青公司。酶标山羊抗小鼠 IgG 抗体购自 TaKaRa 公司。小鼠 Ig亚类检测试剂盒、福氏佐剂及 PEG 购自Sigma 公司。 方法 动物免疫 取 Tat 蛋白 28 μL, 加 mol/L 的PBS() mL 使成 mL 浓度溶液, 加等量福氏完全佐剂用三通器混匀制成油包水的乳化液。在 5 只 BALB/c 小鼠的颈背部及双侧腹股沟皮下多点注射, 剂量为 mL/只, 间隔 3 周后以同样方法(加不完全福氏佐剂乳化)免疫, 再间隔 2 周后取等量蛋白溶于生理盐水中经腹腔进行第 3 次免疫, 最后 1 次免疫 2 周后测小鼠血清效价, 选择血清效价高的小鼠再经腹腔加强免疫, 3 d 后取脾细胞进行融合。 mAb 细胞株的建立 取免疫小鼠脾...
