齐鲁医学BCA蛋白浓度测定-酶标仪法

BCA 法测定蛋白浓度-酶标仪一、药品1.BCA 蛋白浓度测定试剂盒（P0012，500 次酶标仪，碧云天），含以下成分：a)BCA 试剂 A（P2025-05，100ml，碧云天），室温保存b)BCA 试剂 B（P2025-05，3ml，碧云天），室温保存c)蛋白标准（5mg/ml BSA）（P2025-05，1ml，碧云天），-20 度保存二、仪器和试剂1.酶标仪（测定波长为 540-595nm 之间，562nm 最佳），水浴锅2.96 孔单条可拆酶标板（平底）3.15 ml 离心管 1 个（准备 BCA 工作液用） 4.1.5 ml 离心管 1 个（准备蛋白标准品工作液用）5.单道移液器和枪头，8 道移液器（排枪）和枪头6.PBS三、操作步骤1.水浴锅调至 37℃。2.蛋白标准品工作液（1 mg/ml）的配制：将蛋白标准品（5mg/ml）从-20℃冰箱中取出，完全溶解并混匀。取 60μl 蛋白标准品（5mg/ml），加入 240μl PBS，即稀释 5 倍，即配成蛋白标准品工作液（1 mg/ml）。3.计算 BCA 工作液总量=0.2 ml×（样本数+8）×2×1.1（标准品和样本均需测复孔）。BCA 工作量按 50 体积的 BCA 试剂 A 加上 1 体积的 BCA 试剂 B 配制（即 50:1），需充分混匀。BCA 工作液室温 24 小时内稳定。样本数(n)1~56~78~1011~1213~1415~1617~1920~2122~2324~26A（ml）6789101112131415B（ml）0.120.140.160.180.20.220.240.260.280.3总量(ml)6.127.148.169.1810.211.2212.2413.2614.2815.34.按下表配制 8 个蛋白标准液（S0~S7），充分摇匀。单条酶标板蛋白标准品工作液（1 mg/ml）(l)PBS(l)蛋白标准品终浓度(mg/ml)AS001000BS15950.05CS210900.1DS320800.2ES430700.3FS540600.4GS650500.5HS710001.05.将 96 孔酶标板的 A1 孔放在左上角，按下表加入蛋白样本和标准品。（1）先在第 3~4 条酶标板的蛋白样本孔（N1~N8）中加入待测蛋白样本各 2μl，再用排枪在蛋白样本孔中追加 PBS 液各 18μl，使总量达到 20μl。（此时蛋白样本的稀释比为 10，适用于估计蛋白浓度为 2~8mg/ml 时。如估计蛋白浓度太高或太低，可适当调整稀释比例）（2）再在第 1~2 条酶标板的蛋白标准品孔（S0~S7）中加入上面配制的 8 个蛋白标准液各 20μl。123456789101112AS0S0N1N1BS1S1N2N2CS2S2N3N3DS3S3N4N4ES4S4N5N5FS5S5N6N6GS6S6N7N7HS7S7N8N86.用排枪在各孔中加入 200μl BCA 工作液，轻轻摇匀，37℃放置 30 分钟或室温放置 2 小时。（注意：①每次测定时必须都做标准曲线。因为 BCA 法测定时颜色会...