微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。原理通过比较试验 4 组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。2.验证方法步骤验证前的准备：进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。试验菌应包括G-、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。验证试验的操作计划：用 3 个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示 3 次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于 70%，试验组回收率也不低于 70%。3.试验实施试验前的准备3.1.1 主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。3.1.2 操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。环境洁净度不应低于 10000 级，局部洁净度为 100 级（或放置同等级净化工作台）。操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于。3.1.3 试验样品：批号：批号：批号：3.1.4 培养基：培养基名称培养基批号配制日期有效期至改良马丁琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基胆盐乳糖增菌培养基营养琼脂培养基3.1.5 稀释液：无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经 115°C 髙压蒸汽灭菌 30min。3.1.6 验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：菌株名称内控编号大肠埃希菌 CMCC(B)44102Ec-金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003Sa-枯草芽孢杆菌 CMCC(B)63501Bs-白色念珠球菌 CMCC(F)98001Ca-黑曲霉 CMCC(F)98003An-编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。3.1.7 器具：无菌薄膜过滤器：(孔径直径 50mm)、无菌移液管(5ml)4.验证方法菌液的制备将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至 10ml 的无菌营养肉汤中在 30〜35C 下培养 18〜24 小时，将白色念珠菌接种至改良马丁液体培养基中，在 23〜28C 下培养...
