课题六 血红蛋白的提取和分离【课题目标】本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。【课题重点与难点】课题重点：凝胶色谱法的原理和方法。课题难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。【导学诱思】思考 1：分离生物大分子的基本思路是什么？思考 2：蛋白质的分离和提取的原理是什么？思考 3： 高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？思考 4：人们用鸡的红细胞提取 DNA，用人的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？一、基础知识：㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）：1、概念：根据被分离蛋白质的 ，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来分离蛋白质的有效方法。2、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ，而 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 ，相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。3、具体过程：A. 的蛋白质由于 作用进入凝胶颗粒内部而被滞留； 的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在了里之间迅速通过。1凝胶颗粒相对分子质量较小的蛋白质相对分子质量较大的蛋白质（1 ）（2 ）（3 ）（4 ）（5 ）BA多孔板B.（1） 混合物上柱；（ 2 ） 洗 脱 开 始 ， 的 蛋 白 质 扩 散 进 入 凝 胶 颗 粒 内 ； 的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外；（3） 的蛋白质被滞留； 的蛋白质被向下移动。（4） 不同的蛋白质分子完全分开；（5） 的蛋白质行程较短，已从 中洗脱出来， 的蛋白质还在行进中。㈡ 缓冲溶液：1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液 PH 发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。2、作用：能够抵制 的对溶液的 的影响，维持 PH 基本不变。3、缓冲溶液的配制通 常 由 种 缓 冲 剂 溶 解 于 水 中 配 制 而 成 。 调 节 缓 冲 剂 的 就可以制得 使用的缓冲液。思考：说出人体血液中缓冲对？ 思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的 PH 环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性）㈢电泳：1、概念：指 发...
