基因工程、细胞工程一、基因工程1．基本工具：(1)工具酶。① 限制性核酸内切酶(又称限制酶)：切割目的基因和载体(断开磷酸二酯键)。②DNA 连接酶：缝合 DNA 片段断口处外侧链(形成磷酸二酯键)。(2)载体应具备的条件。① 能在宿主细胞内稳定存在并复制：便于目的基因的表达。② 有一至多个限制酶切割位点：便于外源 DNA 分子的插入。③ 具有标记基因：鉴定与选择重组 DNA 分子。2．基本操作程序：(1)目的基因的获取。① 基因文库获取，② PCR 技术扩增，③化学方法直接人工合成。(2)基因表达载体的构建。① 启动子：启动转录。② 目的基因：控制需要的特定性状。③ 终止子：终止转录。④ 标记基因：筛选重组细胞。(3)将目的基因导入受体细胞。① 导入植物细胞：最常用方法是农杆菌转化法，另外还有花粉管通道法和基因枪法。② 导入动物细胞：最常用方法是显微注射法。③ 导入微生物细胞：常用 Ca 2 ＋ 处理使受体细胞处于感受态。(4)目的基因的检测与鉴定。① 分子水平检测：以目的基因单链作探针，进行分子杂交；抗原—抗体杂交。② 个体水平鉴定：抗虫、抗病的接种实验。3．应用：(1)植物基因工程。① 抗虫、抗病、抗逆转基因植物；② 利用转基因改良植物的品质。(2)动物基因工程。① 提高动物生长速度；②改善畜产品的品质；③用转基因动物生产药物；④用转基因动物作器官移植的供体。(3)基因工程药物。(4)基因治疗。① 体外基因治疗；②体内基因治疗。二、植物组织培养与动物细胞培养的比较三、植物体细胞杂交、动物细胞融合与细胞核移植1．若该图为植物体细胞杂交示意图：(1)原生质体的制备。用纤维素酶和果胶酶除去植物细胞的细胞壁，得到原生质体 A 和 B。(2)促融方法。① 过程中，常用的化学试剂是聚乙二醇。(3)新细胞壁的形成。② 过程形成的 D 细胞具有一定的形状，该过程与细胞中的高尔基体密切相关。(4)杂种植株的培育。③ 过程为植物组织培养，依据的原理是细胞的全能性，所得杂种植株可育(“可育”或“不可育”)。2．若该图为动物细胞融合示意图：(1)促融方法。与植物体细胞杂交相比，①过程中特有的方法是灭活病毒处理。(2)原理：①过程的完成依赖于细胞膜的流动性。(3)应用。若 A 细胞为骨髓瘤细胞，B 细胞为 B 淋巴细胞，那么 D 细胞称为杂交瘤细胞，由 D 细胞连续分裂产生大量细胞的过程，称为克隆。这种细胞既能无限繁殖，又能产生专一抗体。3．若该图为体细胞核移植过程示意图...
