1. 根据样品数量，按 50 体积 BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂 B（50:1）配制适量 BCA 工作液，充分混匀。BCA 工作液室温 24 小时内稳定。2. 完全溶解蛋白标准品，取 10 微升稀释至 100 微升 ，使终浓度为 0.5mg/ml。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用 0.9%NaCl 或 PBS 稀释标准品。3. 将标准品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20 微升加到 96 孔板的标准品孔中，加标准品稀释液补足到 20 微升。4. 加适当体积样品到 96 孔板的样品空中，加标准品稀释液到 20 微升。5. 各孔加入 200 微升 BCA 工作液，37℃放置 30 分钟。 注：也可以在室温放置 2 小时，或 60℃放置 30 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。假如浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。6.测定 A562，540-595nm 之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出蛋白浓度。混匀的问题，可以在参数中选择快速震荡，30s 就可以了做的好的话可以达到 4 个九事先配好各个浓度的 bsa 标准品，step 1A 液和 B 液按 50：1 混合，（比如你要测 2 个样品，可以是 6 个标准曲线点0，0.05，0.1，0.2，0.5，1mg/ml，加上 2 个样品，也就是 8 个孔，做平行就是 16 孔，那么取 A 液取 16*0.2=3.2ml，B 液取 64ul 混合就 ok 了）step2 每孔加 200ul 混合液，然后标准曲线孔加入 25ul 标准品 ，样品稀释到合适的比例，也加入 25ul（假如图省事的话，比如也可以加 1ul 样品，再加 24ul 水补齐，加样的时候可能不会太准）step3 37 度孵育 30minstep4 测 od 565，附近也行内容总结（1）1. 根据样品数量，按 50 体积 BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂B（50:1）配制适量 BCA 工作液，充分混匀（2）注：也可以在室温放置 2 小时，或 60℃放置 30 分钟（3）假如浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间（4）根据标准曲线计算出蛋白浓度
