RD 人恶性胚胎横纹肌瘤细胞培育操作1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培育基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，加 1-2mL 培育基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培育瓶中培育过夜（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培育基，培育过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：假如细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培育。 1. 弃去培育上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。 2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培育瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培育瓶后加少量培育基终止消化。 3. 按 6-8ml/瓶补加培育基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 min，弃去上清液，补加 1-2mL 培育液后吹匀。 4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培育基的新皿中或者瓶中。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；1. 细胞冻存时，弃去培育基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培育基终止消化，可使用血球计数板计数。2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于 1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80℃冰箱，2h 以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。内容总结（1）RD 人恶性胚胎横纹肌瘤细胞培育操作1 ）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解 冻，加入 4mL 培育基混合均匀（2）2 ）细胞传代：假如细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培育（3）3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存（4）3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80℃冰箱，2h 以后转入液氮灌储存（5）记录冻存管位置以便下次拿取
